Name: Dissecção do CNS Larval em Drosophila melanogaster (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Aprenda a dissecção do sistema nervoso central em larvas de Drosophila melanogaster. Este método preserva estruturas internas para estudos neurobiológicos detalhados e análise de proteínas.

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<ol><li> Dissecar 3 de larvas, deixando CNS ligado à cutícula. Coloque em um tubo de 1,5 ml. </li><li> Fix na PBS (1x), contendo formaldeído 2% por 40 min com balanço. ; Use 250ul para todos os SNC 10/05 dissecados. </li><li> Remover formaldeído e brevemente lavar 3 vezes com PBS + 0,1% Triton X-100 (PBST). Use uma pipeta Pasteur finamente puxado para evitar a perda de tecido. </li><li> Bloquear sites não-específicos de ligação às proteínas e permeabilizar as membranas celulares através da incubação do tecido 1-8 horas em PBST + BSA 5%, balançando a 4 ° C. </li><li> Incubar em anticorpo primário diluído em PBST + 5% BSA balançando a 4 ° C durante a noite. Diluição do anticorpo ideal varia para diferentes anticorpos. </li><li> Enxágüe 3x no PBST seguido por duas lavagens 30min a 4 ° C. </li><li> Incubar em anticorpo secundário diluído em PBST + BSA 5% para 03/01 horas balançando a 4 ° C. Enxágüe 3x no PBST seguido por duas lavagens 30min a 4 ° C. Se o secundário é conjugado a um composto sensível à luz, enrole o tubo em papel alumínio. </li><li> Dissecar o tecido adicionais (se necessário) e montagem em slides. </li></ol>

<ol>
	<li>Lin, D. M., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+and+increased+expression+of+fasciclin+II+alters+motoneuron+growth+cone+guidance.">Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance.</a> Neuron. 13, 507-523 (1994).</li><li>Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=even+skipped+is+required+to+produce+a+trans-acting+signal+for+larval+neuroblast+proliferation+that+can+be+mimicked+by+ecdysone.+Development+128.">even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128.</a> , 1899-1909 (2001).</li></ol>

Os autores não têm nada a declarar.

Este vídeo demonstra como dissecar o SNC de terceiro instar as larvas Drosophila. Após a dissecção, o SNC pode ser manchado usando um protocolo de imuno-histoquímica padrão. Atualmente, grande parte ainda é desconhecido sobre como o sistema nervoso adulto é gerado, bem como a forma como ele armazena e transmite informações. Estudos do desenvolvimento larval Drosophila CNS deverá reforçar o nosso conhecimento da fiação do sistema nervoso e função. Larvas de Drosophila apresentam uma série de comportamentos stereotpyed, como uma respo...

<table><tbody><tr><td>Pinzeta</td><td>de ponta fina</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placa de vidro de relógio com 9 cavidades</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri de plástico</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissecção do cns larval em drosophila melanogaster

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

O sistema nervoso central (SNC) de larvas de Drosophila é complexa e mal compreendida. Uma maneira de investigar o sistema nervoso central é a utilização de imuno-histoquímica para analisar a expressão do romance de várias proteínas e marcador. Coloração das larvas de todo é inviável porque a cutícula resistente impede anticorpos de penetrar no interior da cavidade do corpo. , A fim de mancha estes tecidos é necessário dissecar o animal antes de fixar e coloração. Neste artigo vamos demonstrar como dissecar as larvas Drosophila sem danificar o sistema nervoso central. Comece rasgando a larva ao meio com uma pinça fina, e depois vire a cutícula &quot;dentro para fora&quot; para expor o CNS. Se a dissecção é realizada com cuidado o SNC vai permanecer solidários com a cutícula. Costumamos manter o sistema nervoso central associadas à cutícula durante todas as etapas de fixação e coloração, e só remover completamente o sistema nervoso central da cutícula pouco antes da montagem das amostras em lâminas de vidro. Mostramos também algumas imagens de um representante do SNC larval corados com Eva, um fator de transcrição expresso em um subconjunto de neurônios no sistema nervoso central. O artigo conclui com uma discussão sobre alguns dos usos práticos da técnica e as dificuldades potenciais que possam surgir.

Neste artigo vamos demonstrar como dissecar o sistema nervoso central do terceiro instar as larvas Drosophila.

Dissecção do CNS Larval em Drosophila melanogaster

O sistema nervoso central (SNC) das larvas de Drosophila é complexo e pouco compreendido. Uma maneira de investigar o SNC é utilizar a imuno-histoquímica para ...

Meu nome é Nate Fer. Sou aluno de pós-graduação aqui na Princeton. Ok. A coisa que você quer fazer é encontrar o verme e então transferi-lo para uma placa com um pouco de PBS.Então é assim que eles vão ficar, você os corta ao meio e todas as vísceras saem. Aqui, tenho a cutícula com um grupo de estruturas internas, tentando garantir que ela esteja virada do avesso e verificando se o SNC ainda está preso. Conseguimos. Sim. Está bem aqui.Aqui mesmo. Qual deles? Você pode ver na minha pinça direita.Aqui você tem dois lobos diferentes e, então, há o próprio SNC, que se estende para baixo como uma raiz pivotante, bem aqui ao lado direito dos ganchos escuros da boca e do restante da cutícula. Você gostaria de separar o SNC assim? Sim, claro.Consigo fazê-lo. E isso está sendo visto de cima para baixo. Então você vê os dois lobos e, em seguida, vê o próprio SNC.Então, por que você realiza este experimento? Bem, estamos interessados em analisar a expressão de proteínas no sistema nervoso das larvas. E, portanto, a melhor maneira de fazê-lo é simplesmente separar o tecido larval.E como é difícil para os anticorpos penetrarem na cutícula em um tecido inteiro, primeiro dissecamos o SNC da larv

dissection-of-larval-cns-in-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Drosophila larval Dissection MNJ

Drosophila melanogaster larvas fornecer um modelo de sistema ideal para investigar os mecanismos de transporte axonal dentro larval nervos segmentares. Usando este procedimento, 3 de larvas portadores de mutações diferentes podem ser comparadas às larvas do tipo selvagem.

Visualização de Larval Nervos segmentar em 3 Rd Instar Drosophila Preparações larval

Nós descrevemos um Flippase induzida interseccional Gal80/Gal4 repressão método (FINGR), permitindo que o tecido específico FLP para determinar Gal80 padrões de expressão. Onde quer que Gal4 e sobreposição FLP, Gal4 expressão é ligado (Gal80 virado para fora) ou desligado (Gal80 capotou in). O método FINGR é versátil para análise clonal e mapeamento do circuito neural.

Mapeamento e Aplicação de Enhancer-trap Expressão Flippase em larval e Adultos Drosophila CNS

Este vídeo descreve como dissecar e isolar o cérebro adulto de Drosophila – um procedimento necessário para visualizar o órgão, que é obscurecido pela cutícula, olho e tecido traqueal. O protocolo de exemplo mostra uma demonstração detalhada produzindo preparações de alta qualidade que podem ser usadas para imunocoloração e métodos de imagem em neurobiologia de Drosophila.

drosófila Dissecção do cérebro adulto: um método em neurobiologia de moscas

Este vídeo demonstra a dissecação e montagem de explantes cerebrais de larvas de Drosophila. O sistema nervoso central (SNC), ligado aos discos oculares, é extraído das larvas e, em seguida, montado em uma lâmina de vidro em uma solução salina fisiológica.

Dissecção e montagem de explantes cerebrais de larvas de moscas-das-frutas

Um paradigma lesão utilizando a Drosophila larval cordão nervoso ventral para investigar a regeneração do sistema nervoso central e de reparação é descrito. Stabbing seguido por varredura a laser microscopia confocal em amostras de lapso de tempo e fixa, combinada com a análise quantitativa, com software desenvolvido propositadamente e genética, são utilizados para investigar os mecanismos moleculares do CNS regeneração e reparo.

Um Paradigma para Investigar Lesão de reparação do sistema nervoso central em<em&gt; Drosophila</em

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Imagens ao vivo de<em&gt; Drosophila</em&gt; larval Neuroblastos

Este protocolo descreve a dissecção e imunocoloração de adultos Drosophila melanogaster tecidos do cérebro. Especificamente, este protocolo destaca o uso da Drosophila cogumelo corpo e fotoreceptor neurônios como subconjuntos neuronal de exemplo que podem ser usados com precisão para descobrir princípios gerais subjacentes a muitos aspectos do desenvolvimento neuronal.

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Este protocolo descreve um método para registrar a atividade elétrica descendente do sistema nervoso central Drosophila melanogaster para permitir que o custo-eficiente e conveniente de teste de agentes farmacológicos, mutações genéticas das proteínas neurais, e/ou o papel das vias fisiológicas inexploradas.

Eletrofisiológica gravação da atividade do sistema nervoso Central de terceiro ínstar Drosophila Melanogaster

Este protocolo descreve três etapas para preparar os lobos ópticos de larvas e adultos de Drosophila para imagem: 1) dissecções cerebrais, 2) imuno-histoquímica e 3) montagem. A ênfase é colocada na etapa 3, pois são necessárias orientações de montagem distintas para visualizar estruturas específicas do lóbulo óptico.

Dissecção, imuno-histoquímica e montagem de cérebros de larvas e adultos de Drosophila para visualização do lobo óptico

Aqui, discutimos um fluxo de trabalho para preparar, dissecar, montar e obter imagens de cérebros de explantes vivos de larvas de terceiro ínstar de Drosophila melanogaster para observar a dinâmica celular e subcelular sob condições fisiológicas.

Imagem de células vivas de cérebros de larvas de terceiro ínstar de Drosophila melanogaster

Aprenda a dissecção do sistema nervoso central em larvas de Drosophila melanogaster. Este método preserva estruturas internas para estudos neurobiológicos detalhados e análise de proteínas.

Dissecção do CNS Larval em Drosophila melanogaster

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