Name: Obtenção de ovos de Xenopus laevis fêmeas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-20T20:12:00.000+00:00
Duration: 4 min 47 s
Description: Aprenda a obter e preparar ovos de Xenopus laevis para estudos de biologia celular e desenvolvimento. Este protocolo demonstra indução da postura, coleta e seleção de ovos viáveis para pesquisa.

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O protocolo de texto completo para essa abordagem experimental está disponível em <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">protocolos atuais em biologia celular</a> .

Os autores não têm nada a declarar.

obtenção de ovos de xenopus laevis fêmeas

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Os ovos de Xenopus laevis intacta, lisadas, e / ou fracionados são úteis para uma ampla variedade de experimentos. Este protocolo mostra como induzir a postura de ovos, coletar e dejelly os ovos, e classificar os ovos para remover quaisquer ovos danificados.

Obtenção de ovos de Xenopus laevis fêmeas

Os ovócitos de Xenopus laevis intactos, lisados e/ou fracionados são úteis para uma ampla variedade de experimentos. Este protocolo demonstra como induzir a postura de ovos, ...

Extratos de ovos de Xip Labis são úteis como fontes de material citoplasmático e de organelas para a reconstituição in vitro de eventos celulares, como montagem do núcleo e importação de proteínas nucleares. É claro que, antes de poder usar extratos de ovos, é necessário obter os ovos de rãs fêmeas. Olá, meu nome é Marie Cross e sou aluna de pós-graduação no laboratório da Dra. Maureen Power, do Departamento de Biologia Celular da Universidade Emory, em Atlanta, Geórgia.Hoje vamos mostrar como obter ovos de ágar-ágar D de fêmeas adultas de opus lavis. Este procedimento inclui os seguintes passos: preparo dos sapos para a postura de ovos com soro de gonadotrofina de rã prenhe, indução da postura de ovos com gonadotrofina coriônica humana e seleção de ovos ou cistos defeituosos. Então, vamos começar.Para produzir ovos, rãs fêmeas maduras são primeiramente sensibilizadas com gonadotrofina de soro de égua prenhe. Para iniciar o procedimento de sensibilização, prepare um tanque contendo cloreto de sódio de cem milimolares para acomodar as rãs. Após a injeção, as rãs sensibilizadas devem ser mantidas numa densidade de aproximadamente uma rã por litro.A produção ideal de ovos é mantida mantendo-se os sapos a 18 graus Celsius. Usando uma agulha de 27 gauge acoplada a uma seringa de um mil, injete 0,5 mils de 200 unidades por mil de gonadotropina de soro de égua prenhe no saco linfático dorsal do sapo por via subcutânea.Retorne os sapos maduros ao tanque contendo cloreto de sódio de cem milimolares. Após dois a três dias, induza a postura de ovos injetando nos sapos 0,5 mililitros de cem unidades por mililitro de gonadotrofina coriônica humana, novamente por via subcutânea no saco linfático dorsal.Após a injeção, coloque cada sapo em cinco litros de cloreto de sódio de cem milimolares. É melhor colocar cada sapo em um recipiente separado, pois a qualidade dos ovos varia de sapo para sapo. Cerca de 16 a 22 horas após a injeção de gonadotrofina coriônica humana, remova o sapo para um tanque com água limpa e despeje os ovos em um béquer.É aconselhável observar os sapos por um a dois dias em busca de sinais de infecção no local da injeção. Nesta fase, um revestimento gelatinoso transparente envolve cada ovo, o que impede que eles entrem em contato uns com os outros. Para remover a geleia dos ovos, lave os ovos uma vez com solução de L-cisteína a 2%, pH 8,0, e continue então a incubação em um recipiente com 100 mL de solução de L-cisteína a 2% por sapo durante aproximadamente cinco minutos. À temperatura ambiente, agite suavemente os ovos periodicamente após cinco minutos.Despeje a solução de cisteína dos ovos de deje e lave-os três vezes em uma solução de Ringer modificada 0,25 x. Para remover detritos, despeje os ovos em uma placa de Petri de vidro de cem milímetros, trabalhando sob um microscópio estereoscópico. Remova os ovos estragados da placa de Petri com uma pipeta de Pasteur.Os óvulos maduros de xip possuem uma metade superior fortemente pigmentada e uma metade inferior clara. Um pequeno ponto branco, indicativo da maturação do oócito, deve ser visível no centro da metade fortemente pigmentada do óvulo maduro. Um bom óvulo é aquele que apresenta pigmentação uniforme e bem modelada.Tudo o que não tiver essa mancha branca é um ovócito e deve ser removido. Quaisquer ovos que estejam brancos, aumentados ou com pigmentação não uniforme também devem ser removidos. Um ovo particularmente ruim apresenta-se como uma bolinha branca e esbranquiçada, com o limite entre os hemisférios completamente obscurecido. Lave e selecione os ovos duas a três vezes, despejando o tampão de lise de ovos sobre eles e, em seguida, derramando cuidadosamente o tampão, minimizando o número de ovos que são derramados.Agora os ovos podem ser lisados e os extratos podem ser preparados. Acabamos de mostrar como obter e remover o gel dos ovos de fêmeas maduras de Xenopus laevis. Certifique-se de assistir aos nossos outros dois vídeos, que mostram como preparar extratos de ovos brutos, bem como como reconstituir in vitro a montagem nuclear utilizando extratos de ovos fracionados.Então é isso. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

obtaining-eggs-from-xenopus-laevis-females

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fertilização de Oócitos Xenopus Utilizando o método de transferência do host

Xenopus embrionárias epitélios são um sistema modelo ideal para estudar os comportamentos das células, como o desenvolvimento de polaridade e mudar de forma durante a morfogênese epitelial. Histologia tradicional de amostras fixa é cada vez mais sendo complementado por live-célula de imagem confocal. Aqui nós demonstrar os métodos para isolar os tecidos de rã e visualizar ao vivo as células epiteliais e seus citoesqueleto usando live-célula microscopia confocal.

Em células vivas, Imagem e Análise Quantitativa de células embrionárias epiteliais em Xenopus laevis</em

Xenopus egg extracto é um sistema modelo útil para investigar o checkpoint danos no DNA. Este protocolo é para a preparação de extractos de ovos de Xenopus e os danos do ADN reagentes indutores de ponto de verificação. Estas técnicas são adaptáveis ​​a uma variedade de abordagens que danificam o ADN no estudo da sinalização checkpoint danificam o DNA.

Estudo da Checkpoint Dano ao DNA usando<em&gt; Xenopus</em&gt; Os extratos de ovos

Produção de<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Egg Extrai identificar RNAs associada aos microtúbulos

Um método é descrito para a análise de degradação de proteínas utilizando radiolabeled e proteínas luciferase de fusão em Xenopus extrato do ovo e sua adaptação para high-throughput screening para modulares de degradação de proteínas.

Reconstituição de β-catenina degradação na<em&gt; Xenopus</em&gt; Extrato de ovo

Descrevemos métodos de manipulação de oócitos imaturos de Xenopus laevis, maturação in vitro de oócitos em óvulos e injeção intracitoplasmática de espermatozoides. Este protocolo permite a degradação de algumas proteínas maternas e a superexpressão de genes de interesse na fertilização e, portanto, é valioso para estudar papéis de fatores específicos no desenvolvimento embrionário inicial.

Manipulação e<em&gt; In Vitro</em&gt; Maturação<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Oócitos, seguido de injeção intracitoplasmática de espermatozóide, para estudar o desenvolvimento embrionário

O controle da síntese proteica ocorre principalmente na etapa de iniciação da tradução, cujas deficiências estão ligadas a diversos distúrbios. Para melhor entender sua etiologia, descrevemos aqui um protocolo usando oócitos de Xenopus laevis avaliando a tradução do transcrito mos na presença de um mutante do fator de iniciação da tradução eIF4G1.

Xenopus laevis como um modelo para identificar Tradução Impairment

Os mecanismos de escalonamento celular e intracelular permanecem indescritíveis. O uso de extratos de embriões de Xenopus tem se tornado cada vez mais comum para elucidar mecanismos de regulação do tamanho das organelas. Este método descreve a preparação do extrato de embrião e um novo ensaio de escala nuclear através do qual os mecanismos de regulação do tamanho nuclear podem ser identificados.

Um ensaio-Free Cell Usando<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryo Extrai para estudar mecanismos de regulação Tamanho Nuclear

Este protocolo demonstra um método baseado em fluorescência para visualizar a vasculatura e quantificar sua complexidade em Xenopus tropicalis . Os vasos sanguíneos podem ser visualizados minutos após a injecção de um corante fluorescente no coração batendo de um embrião após manipulações genéticas e / ou farmacológicas para estudar o desenvolvimento cardiovascular in vivo .

Visualização e Análise Quantitativa da Angiogênese Embrionária<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Descrevemos um método para a preparação e imagem ao vivo de extratos citoplasmáticos não diluídos de ovos de Xenopus laevis .

Xenopus laevis Preparação de extrato de ovo e métodos de imagem vivos para visualização da organização citoplasmática dinâmica

Quando as proteínas precursoras do Fator de Crescimento Transformador são expressas em embriões xenopus laevis, elas escurecem, são cortadas e são secretadas na blastocoele, que começa no final da blastula até o estágio gastrula inicial. Descrevemos um método para aspirar produtos de decote da cavidade blastocoele para análise de imunoblot.

Análise do Fator de Crescimento Transformador ß Produtos de Decote Familiar Secretados Na Blastocoele de Embriões Xenopus laevis

Aprenda a obter e preparar ovos de Xenopus laevis para estudos de biologia celular e desenvolvimento. Este protocolo demonstra indução da postura, coleta e seleção de ovos viáveis para pesquisa.

Obtenção de ovos de Xenopus laevis fêmeas

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