Name: Preparação e fracionamento de Xenopus laevis Egg Extractos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-27T12:38:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Aprenda a preparar e fracionar extratos de ovos de Xenopus laevis para reconstituição de processos celulares. Este método permite obter frações citoplasmáticas e de membrana leve para estudos bioquímicos de montagem nuclear e replicação de DNA.

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O protocolo de texto completo para essa abordagem experimental está disponível em <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract ]">protocolos atuais em biologia celular</a> .

Os autores não têm nada a declarar.

preparação e fracionamento de xenopus laevis egg extractos

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Extratos de ovo cru e fracionado Xenopus pode ser usado para fornecer ingredientes para reconstituir processos celulares para análise morfológica e bioquímica. Lise de ovo e centrifugação diferencial são usados ​​para preparar o extrato bruto que, por sua vez, usado para preparar extratos fracionados e preparações de membrana de luz.

Preparação e fracionamento de Xenopus laevis Egg Extractos

Extratos brutos e fracionados de ovócitos de Xenopus podem ser utilizados para fornecer os ingredientes necessários para a reconstituição de processos celulares para fins morfológicos e bioquímicos...

Em um vídeo anterior, demonstramos como obter e desgelatinizar ovos de XUS labis maduros. Extratos brutos desses ovos provenientes de fêmeas fornecem uma fonte útil de material citoplasmático e de organelas para a reconstituição in vitro de eventos celulares, como montagem do núcleo, importação de proteínas nucleares e replicação do DNA. Olá, meu nome é Marie Cross e sou aluna de pós-graduação no laboratório da Dra. Maureen Power, do Departamento de Biologia Celular da Universidade Emory, em Atlanta, Geórgia.Hoje vamos mostrar como fracionar o extrato de ovo em frações citoplasmática solúvel e de membrana leve. Este procedimento envolve as seguintes etapas: lisar os ovos, coletar os extratos brutos, fracionar os extratos brutos de ovo, coletar o extrato citoplasmático e coletar a fração de membrana leve do extrato de ovo. Então, vamos começar.Vamos começar lisando ovos e coletando extratos brutos antes da lise dos ovos. Uma pipeta de transferência deve ser feita quebrando uma pipeta de Pasteur e, em seguida, inserindo cuidadosamente a extremidade quebrada em uma bolsa de pipeta. Transfira os ovos para um tubo de polipropileno de 15 mil.É necessária uma pipeta de boca larga para evi

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Biology

Biologia

Os ovos de Xenopus laevis intacta, lisadas, e / ou fracionados são úteis para uma ampla variedade de experimentos. Este protocolo mostra como induzir a postura de ovos, coletar e dejelly os ovos, e classificar os ovos para remover quaisquer ovos danificados.

Obtenção de ovos de Xenopus laevis fêmeas

Montagem membrana nuclear é um passo essencial no ciclo de divisão celular, este processo pode ser replicado no tubo de ensaio, combinando Xenopus cromatina de espermatozóides, citosol, e frações de membrana luz. Núcleos são formados completa, incluindo membranas nuclear com complexos de poros, e estes núcleos reconstituídos são capazes de processos normais de nuclear.

In Vitro Assembléia Nuclear Usando Extractos Egg fracionado Xenopus

Xenopus embrionárias epitélios são um sistema modelo ideal para estudar os comportamentos das células, como o desenvolvimento de polaridade e mudar de forma durante a morfogênese epitelial. Histologia tradicional de amostras fixa é cada vez mais sendo complementado por live-célula de imagem confocal. Aqui nós demonstrar os métodos para isolar os tecidos de rã e visualizar ao vivo as células epiteliais e seus citoesqueleto usando live-célula microscopia confocal.

Em células vivas, Imagem e Análise Quantitativa de células embrionárias epiteliais em Xenopus laevis</em

Este protocolo de vídeo demonstra um método para a geração de...

Produção de transgênicos Xenopus laevis Por Restrição Integração Mediada por Enzima e Transplante Nuclear

Xenopus egg extracto é um sistema modelo útil para investigar o checkpoint danos no DNA. Este protocolo é para a preparação de extractos de ovos de Xenopus e os danos do ADN reagentes indutores de ponto de verificação. Estas técnicas são adaptáveis ​​a uma variedade de abordagens que danificam o ADN no estudo da sinalização checkpoint danificam o DNA.

Estudo da Checkpoint Dano ao DNA usando<em&gt; Xenopus</em&gt; Os extratos de ovos

Produção de<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Egg Extrai identificar RNAs associada aos microtúbulos

Um método é descrito para a análise de degradação de proteínas utilizando radiolabeled e proteínas luciferase de fusão em Xenopus extrato do ovo e sua adaptação para high-throughput screening para modulares de degradação de proteínas.

Reconstituição de β-catenina degradação na<em&gt; Xenopus</em&gt; Extrato de ovo

Os mecanismos moleculares de descondensação da cromatina mitótica altamente compactada são mal definidos. Apresentamos um ensaio livre de células baseado em aglomerados de cromatina mitótica isolados de células HeLa e extrato de ovo de Xenopus laevis que reconstitui fielmente o processo de descondensação in vitro.

A Free Cell Ensaio para estudar Chromatin descondensação no fim da mitose

Os mecanismos de escalonamento celular e intracelular permanecem indescritíveis. O uso de extratos de embriões de Xenopus tem se tornado cada vez mais comum para elucidar mecanismos de regulação do tamanho das organelas. Este método descreve a preparação do extrato de embrião e um novo ensaio de escala nuclear através do qual os mecanismos de regulação do tamanho nuclear podem ser identificados.

Um ensaio-Free Cell Usando<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryo Extrai para estudar mecanismos de regulação Tamanho Nuclear

Nós apresentamos um método para a geração de em vitro auto-sustentado mitótica oscilações no nível de célula única encapsulando extratos de ovos de Xenopus laevis em microemulsões de água em óleo.

Reconstituição das oscilações do ciclo celular em microemulsões dos extratos de ovo sem célula Xenopus

Descrevemos um método para a preparação e imagem ao vivo de extratos citoplasmáticos não diluídos de ovos de Xenopus laevis .

Xenopus laevis Preparação de extrato de ovo e métodos de imagem vivos para visualização da organização citoplasmática dinâmica

Aprenda a preparar e fracionar extratos de ovos de Xenopus laevis para reconstituição de processos celulares. Este método permite obter frações citoplasmáticas e de membrana leve para estudos bioquímicos de montagem nuclear e replicação de DNA.

Preparação e fracionamento de Xenopus laevis Egg Extractos

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