Teste Comportamental olfativo no rato adulto

O sistema olfativo ou o sentido do olfato de roedores tornou-se uma área de pesquisa cada vez mais popular. Para testar a sensibilidade olfativa, permite-se que um camundongo se habitue a uma gaiola sem cama de material e, em seguida, é exposto a pedaços de papel de filtro contendo concentrações crescentes de odorizante. O tempo que o camundongo gasta investigando o papel de filtro é então registrado.

O teste de preferência olfativa é realizado exatamente da mesma maneira. No entanto, em vez de concentrações crescentes de odorizante, anota-se o tempo que o camundongo passa investigando diferentes odorizantes. Olá, sou Rochelle Witt do Laboratório da Dra. Rosalyn Siegel, do Departamento de Neurobiologia da Escola de Medicina de Harvard.

Olá, sou Jennifer Deno, também do Laboratório Siegel. Hoje vamos mostrar a você dois procedimentos para testes olfativos. Utilizamos esses procedimentos em nosso laboratório para estudar a sensibilidade olfativa e a preferência olfativa.

Então vamos começar. Para iniciar o procedimento de teste de sensibilidade olfativa, obtenha quatro gaiolas limpas, todas sem cama. As gaiolas devem ter oito polegadas de altura por dez polegadas de largura por dezoito polegadas de comprimento.

Alinhe as quatro gaiolas em uma cabine de segurança biológica. Em seguida, monte divisórias entre cada arena usando papel filtro opaco. Depois, coloque uma cartolina preta sobre a divisória final, de modo que forre o lado e o fundo da gaiola.

Permita que a luz ilumine a arena cobrindo a parte superior da gaiola com uma placa transparente de plexiglass. Agora, comece a habituar os indivíduos a fazer isso. Coloque o primeiro indivíduo na primeira gaiola.

Após 15 minutos, transfira o primeiro animal para a segunda gaiola. Limpe a primeira gaiola com Quatra side tb. Em seguida, coloque o segundo animal na primeira gaiola limpa.

Continue este processo com os sujeitos subsequentes antes dos testes. Coloque um dos sujeitos na quarta gaiola e os habitue por mais 15 minutos. Em última instância, um sujeito deve ser habituado em cada uma das três primeiras gaiolas.

Agora estamos prontos para preparar as amostras de odor. As amostras de odor devem ser preparadas por um pesquisador diferente, cego em relação ao sujeito, genótipos e/ou condições. Inicie o preparo das amostras fazendo um número apropriado de quadrados de papel de filtro de dois polegadas por dois polegadas.

Em seguida, realize as diluições apropriadas do odor preselecionado em tubos cónicos. Tenha em mente que diferentes linhagens de camundongos podem exigir diluições distintas do odor para uma discriminação eficaz entre um grupo controle e um grupo experimental. Devido a essa observação, consideramos útil derivar empiricamente as diluições apropriadas de odor em indivíduos semelhantes ao grupo controle antes de prosseguir com os testes experimentais em camundongos ingênuos. Para amostras hidrofóbicas, como manteiga de amendoim, utilize óleo como solvente; para todas as demais, use outro solvente apropriado.

Use um vórtex com água destilada para garantir que as diluições sejam misturadas adequadamente. Em seguida, posicione um dispositivo digital de gravação de vídeo na extremidade oposta da cabine de segurança, de modo que toda a extremidade da gaiola esteja em foco. Faça um vídeo preliminar para garantir que as configurações da câmera sejam adequadas.

No caderno de laboratório, registre a ordem em que as diluições serão testadas, tomando o cuidado de randomizar a ordem em cada ensaio. Registre também a ninhada e os números de identificação do sujeito. Uma vez que o sujeito tenha sido habituado por 15 minutos na arena, inicie a preparação para o primeiro ensaio.

Pipete a primeira diluição para cima e para baixo no tubo cônico antes de transferi-la para um quadrado de papel de filtro. A superfície do papel de filtro deve ser coberta idealmente em aproximadamente 85%. Utilize uma toalha de papel para garantir que o papel de filtro não fique excessivamente saturado.

Agora que o papel-filtro perfumado está preparado, estamos prontos para realizar o primeiro teste de sensibilidade olfativa. Para iniciar o teste, comece a gravação em vídeo. Em seguida, coloque o papel-filtro perfumado na gaiola na extremidade oposta à posição atual do animal.

Inicie o cronômetro. Após três minutos, pare a gravação e remova o odor. Em seguida, reinicie o cronômetro e prepare uma segunda amostra de odor.

Após um minuto, inicie a gravação em vídeo. Como antes, coloque a amostra de odor na gaiola na extremidade oposta à posição atual do animal. Repita este procedimento para cada diluição centesimal e para cada sujeito, lembrando-se de registrar o número do arquivo de vídeo para cada ensaio.

Agora que mostramos a você o teste de sensibilidade olfativa, prossiga com o teste de preferência olfativa. Para o teste de preferência olfativa, siga o mesmo procedimento descrito para o teste de sensibilidade olfativa, com exceção de duas pequenas modificações. Primeiro.

Em vez de preparar múltiplas diluições de um único odor preselecionado, prepare ambos os odores atrativos e aversivos. Em segundo lugar, em vez de registrar a diluição a ser testada, registre a ordem das variedades que serão testadas, randomizando a ordem em cada ensaio. Todos os demais passos do procedimento são idênticos ao teste olfativo, incluindo a habituação dos sujeitos, o uso de um pesquisador cego, a aplicação do odor no papel-filtro e a gravação em vídeo cronometrada de cada ensaio.

Uma vez concluído o teste de preferência olfativa, prossiga com a pontuação dos testes olfativos. Após analisar todos os vídeos de sensibilidade e preferência olfativa, determine o tempo total que o sujeito passou explorando cada diluição ou odor, para verificar a consistência. O pesquisador cego deve analisar os vídeos para realizar essa análise.

É útil primeiro visualizar o vídeo e observar o seguinte: quando o papel de filtro é colocado na arena, quando o camundongo se aproxima do papel de filtro, quando o camundongo investiga o papel de filtro e quando três minutos se passam a partir do momento em que o papel de filtro foi inicialmente colocado na arena. Saber quando prestar atenção ao comportamento do camundongo facilita a pontuação precisa do tempo total gasto na exploração durante a análise. Agora, revise todo o vídeo enquanto o analisa. Use um cronômetro para medir todas as investigações dentro de três minutos após a colocação do papel de filtro na arena.

O tempo de investigação é definido como qualquer período em que o nariz do camundongo está a menos de um milímetro do papel-filtro; é importante não incluir nenhum momento em que o camundongo esteja próximo ao papel-filtro, mas não esteja ativamente investigando. Não inclua episódios de mastigação ou lambida do papel, bem como episódios em que o animal esteja sentado sobre o papel, no tempo total de exploração. Siga rigorosa e consistentemente estas regras para analisar com precisão o comportamento olfativo.

Após revisar a gravação, registre o tempo total gasto investigando o papel de filtro e repita a análise para todos os vídeos. A seguir, são apresentados resultados representativos do teste olfativo. Este primeiro gráfico mostra os resultados de uma sessão de treinamento de sensibilidade olfativa.

Cada camundongo do grupo experimental grupo B ou do grupo controle grupo A foi exposto a uma das cinco diluições diferentes de extrato de canela em papel de filtro durante uma sessão de três minutos. O tempo total gasto explorando o papel de filtro foi avaliado, e este gráfico mostra os resultados de uma sessão de teste de preferência olfativa. Cada camundongo foi exposto a cada um dos diferentes aromas em papel de filtro durante uma sessão de três minutos.

O tempo total gasto explorando o papel de filtro foi avaliado. Acabamos de mostrar como testar as habilidades olfativas no camundongo adulto ao utilizar esses procedimentos; é importante usar camundongos ingênuos para testar com precisão as habilidades olfativas e não outras habilidades, como aprendizado e memória. Isso é tudo.

Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.