Мониторинг завод гормонов во время реакции на стресс

Краткое содержание

Простой метод при условии, что дает возможность быстрого извлечения и анализа нескольких гормонов растений из небольшого образца ткани. Процедура использует пар экстракции как торжественные стадии очистки. Все результаты измеряются с помощью ГХ / МС с химической ионизации, которая производит в основном (M +1) + ионов.

Аннотация

Завод гормонов и связанных с ним сигнализации соединения играют важную роль в регуляции завод реакции на различные стимулы окружающей среды и стрессов. Среди наиболее серьезных напряжений насекомых herbivory, возбудитель инфекции, и засухи. Для каждого из этих напряжений определенный набор гормонов и / или их комбинации, как известно, тонкая настройка ответов, тем самым обеспечивая выживание растений. Основных гормонов, участвующих в регулировании этих ответов жасмоновой кислота (JA), салициловая кислота (SA), и абсцизовой кислоты (АБК). Чтобы лучше понять роль отдельных гормонов, а также их потенциал взаимодействия в ходе этих реакций необходимо следить за изменениями в их обилие в временных, так и в пространственной форме. Для простой, чувствительный, и воспроизводимых количественных эти и другие сигнальные соединения мы разработали метод, основанный на паром экстракции и газовой хроматографии / масс-спектрометрии (GC / MS) анализ (1, 2, 3, 4). После извлечения этих соединений из растительной ткани при кислой водной 1-пропанол смешиваются с дихлорметана карбоновой кислоты содержащих соединения метилированной, испаряется под воздействием высокой температуры, и собираются на полимерные абсорбента. После элюирования в пузырек аналитов разделены с помощью газовой хроматографии и обнаружены химические масс-спектрометрии с ионизацией. Использование соответствующих внутренних стандартов затем позволяет по той простой количественный, связывая площадей пиков анализируемого и внутреннего стандарта.

Протокол

1. Для начала нам необходимо подготовить 2 мл завинчивающейся крышкой флакона для добычи: Добавить 400ul буфера добыча (1-пропанол: H2O: концентрированной соляной кислоты 2:1:0.002 об / об / об) и 10 мкл соответствующего внутреннего стандарта (10ng/μl ) на флаконе. Замораживание в жидком азоте, а затем добавить керамические бусины.
2. Добавить растительного материала (от 50 до 200 мг), а флаконах по-прежнему расположены в жидком азоте. Обратите внимание, что вес добавил растительный материал должен быть оценен перед дальнейшей обработкой, чтобы позже для точного количественного определения, которое основано на сырой вес.
3. Убедитесь, что все жидкий азот испаряется до пло....

Обсуждение

Метод, представленный здесь, как доказывали, надежно работать для широкого спектра растений сигнализации соединений при условии, что размер и химической природе соединение не мешает ему быть извлечены, метилированный, и испаряется. Кроме того, метилирование процедуру, как это описано в настоящем документе, не единственный способ дериватизации. Silyllation и ацетилирования и альтернативные методы и протоколы можно легко найти в Интернете.

Если масс-спектрометр не может быть предметом отдельно.......