Здесь мы описываем сердечной хирургической процедуры по имплантации инженерии тканей в атриовентрикулярного (АВ)-паз взрослой крысы Льюис.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Имплантация Engineered ткани в сердце крысы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Грызун хирургия часто важным компонентом в оценке полезности инженерии тканей. Широкий спектр хирургических операций могут быть выполнены в общих лабораторных крыс или мышей, и эти довольно часто служат промежуточным шагом между настольные эксперименты и больших испытаний на животных или испытания на человеке. Учитывая, что грызуны обеспечить установлено, экономически эффективной, и физиологически соответствующие модели системы, в которой для тестирования новых комбинаций лесов материалов и клеток, они особенно хорошо подходят для сердечно-сосудистых исследований тканевой инженерии. В настоящее время мы описываем на открытом сердце хирургическая процедура, чтобы имплантат инженерии ткани, содержащей миогенной клеток-предшественников в атриовентрикулярная (AV) паз сердце крысы. Эти имплантаты предназначены для создания электрических связующим звеном между правое предсердие и правый желудочек с конечной целью предоставления альтернативного лечения с обычными имплантации кардиостимулятора у детей с полной блокадой сердца [1]. Инженерии тканей имплантируется в AV-паз посредством торакотомии. Для наших целей, Льюис крыс под наркозом и invasively вентилируемые для поддержания положительного давления в дыхательных путях во время стерильные хирургические процедуры. Подход к сердцу осуществляют право торакотомия через передне-боковой разрез на 5
Протокол
Часть 1: Индукция общей анестезии
- 200-250 г Льюис крысы под наркозом с 50 мг / кг кетамина и 4 мг / кг Ксилазин вводят иглу 30 G в внутрибрюшинного полости. Верхней части живота и правой груди, обрезаются для удаления волос и разреза тщательно очищены с 70% этанола, а затем повидон-йод раствор для наружного применения антисептика.
- Животное интубированных endotracheally использованием 16 G внутривенный катетер подключен к небольшой респиратор животных (Harvard аппарат). Респиратор связан с испарителем на поставку 0,5 до 1,0% изофлюрана (Baxter), смешанного с 100% кислорода для поддержания общей анестезии. Скорость дыхания и дыхательный объем регулируется в зависимости от массы тела крысы. Животное помещают на грелку (Hood Термо-Pad) для поддержания температуры тела во время хирургического вмешательства.
- Для контроля частоты сердечных сокращений и насыщения кислородом всей хирургической процедуры, пульсоксиметр устройства (Nellcor) обрезается на одну из задних конечностей.
Часть 2: Торакотомия и спроектирован имплантации ткани
- Хирургических сайт подготовлен при стерильных хирургических драпировки, которая удерживается на месте с полотенцем зажимов.
- Разрез делается из передне-боковой для боковой стенке правой груди, чуть выше 5-го межреберья. Интерьер грудь можно получить через 5-го межреберья и небольшой втягивающим (Roboz) находится в положении максимального зрения.
- Перикарда режется чуть выше приложением правое предсердие и правый желудочек от основания к верхушке сердца. После этого паз А.В., была идентифицирована и эпикарда слое, прилегающем к аорто-предсердно-желудочковой треугольник мягко дразнили друг от друга.
- 7-0 Prolene шва (Ethicon) помещается через базальную плечо правого желудочка. 2 х 2 х 2 мм кусок рассечена от инженерии построить ткани и располагаются в пределах паз А.В. и аккуратно связали с Prolene шва.
- Операционного поля проверяется на наличие кровотечения и две 4-0 Викрил швов (Ethicon) помещаются между верхней и нижней межреберье для закрытия грудную клетку.
- Любое очевидное пневмоторакс добывается путем расширения легких путем искусственной вентиляции легких.
- Грудной клетки затем закрывается в слоях.
Часть 3: восстановление
- В то время как животное оправится от операции, разрез сайт проникли с 5 мл 0,25% бупивакаина [2].
- Животное экстубацию следующие отлучение от респиратора и возвращается в клетку со свежей постельные принадлежности, когда он будет окончательно проснулся и грудных. Крыса в дальнейшем вводят 0,01 мг / кг Бупренорфин обезболивания подкожно каждые 12 часов в течение 3 дней.
Часть 4: Представитель результаты
Если выполнены должным образом, описанный хирургической имплантации инженерии тканей в AV-паз сердца (рис. 1) приводит к более чем 90% восстановления животных.
Рисунок 1. Фотографию подвергается сердце показывает месте имплантации инженерных ткани.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Для благоприятного исхода хирургического вмешательства, очень важно правильно интубации и вентиляции invasively животного. Если крыса просто седативные и позволили самостоятельно дышать, обоих легких неизбежно крушение в то время как грудная клетка открыта в связи с общим плевры у грызунов. Перед закрытием груди, любая пневмоторакс должна быть полностью устранены, и легкие полностью расширены, чтобы уменьшить ателектаза. В противном случае, отлучение от респиратора, и восстановление будет неудачной и животных станет гип...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами, установленными Институциональные уходу и использованию животных комитетом на Детской больнице Бостона с.
Благодарности
Эта работа проводится при поддержке грантов от Национального института здоровья (HL068915; HL088206) и взносов в Фонд сердечной проводимости при Детской больнице Бостона.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| Термоподушка Thermo Pad 7x4, 4 шт./упак. | Оборудование | Hood Thermo-Pad, Summerland, BC Canada | MODEL 704R | |
| Аппарат ИВЛ Inspira ASV | Оборудование | Harvard Apparatus | ||
| Ручной пульсоксиметр | Оборудование | Nellcor | N20PA | |
| Ретрактор | Оборудование | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-6514 | |
| Изофлуран (Forane) | Реагент | Baxter Internationl Inc. | 1001936040 | |
| Кетамина гидрохлорид | Реагент | Hospira Inc. | RL-0065 | |
| Ксилазин (AnaSed) | Реагент | Lloyd, Inc. | LB15705A | |
| Бупренорфина гидрохлорид для инъекций | Реагент | Bedford Laboratories | Div-BUP-P00 | |
| Бупивакаин 0.25% | Реагент | Hospira Inc. |
Ссылки
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169, 72-85 (2006).
- Shin, J. W. Low-dose systemic bupivacaine prevents the development of allodynia after thoracotomy in rats. Anesth Analg. 107, 1587-1591 (2008).
- Horstick, G. Surgical procedure affects physiological parameters in rat myocardial ischemia: need for mechanical ventilation. Am J Physiol. 276, H472-H479 (1999).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
