Для изучения процессов развития аскоспор в Gibberella zeae, порядок сбора в стерильных условиях снимают с целью получения высокого уровня информации для описания протокола. Это должно способствовать воспроизводимости эксперимента, важный аспект, когда полное выражение проверяет генома профиля реализованы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Gibberella zeae аскоспор Производство и коллекция для Microarray эксперименты.
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Fusarium graminearum Швабе (teleomorph Gibberella zeae) является завод патогенный микроорганизм, вызывающий заболевание паршой на пшеницу и ячмень, что снижает урожайность и качество зерна. Ф. graminearum также вызывает стебля и ухо гнилей кукурузы и является производителем микотоксинами, такими как трихотецены, которые загрязняют зерно и вредны для людей и скота (Госвами и Kistler, 2004). Грибок производит два типа спор. Аскоспоры, побегов в результате полового размножения, являются основным источником первичной инфекции. Эти споры принудительно выписали из зрелых перитеции и разносятся ветром (Франкля и др. 1999). Вторичные инфекции, в основном вызваны макроконидий которые производятся бесполым путем на поверхности растения. Для изучения процессов развития аскоспор в этом гриб, порядок их взимания в большом количестве в стерильных условиях не требуется. Наш протокол был снят для того, чтобы генерировать высокий уровень информации для понимания и воспроизводимость; важнейших аспектов при полной профилей генной экспрессии генома создаются и интерпретируются. В частности, изменчивость аскоспор прорастания семян и биологическая активность зависят от предварительного манипуляции материала. Использование видео для документирования каждого шага в аскоспор производства предлагается в целях повышения стандартизации, соблюдения все более строгих требований к анализу микрочипов. Процедура требует лишь стандартным лабораторным оборудованием. Шаги показаны для предотвращения загрязнения и способствуют синхронизации времени аскоспор.
Протокол
- Морковный агар (Klittich и Лесли, 1988) был подготовлен в 9-см в диаметре чашки Петри.
- 2 мм куб агара, содержащего свежего мицелия, выращенных на картофельном агаре декстрозы была применена к центру каждой чашке Петри.
- Культуры выращивали при 25 ° С и 12-ч фотопериода в течение 96 часов.
- Один мл водного 2,5% Твин 60 была применена к поверхности культуры (Trail и общие, 2000) и распределены по культуре с пластиковым стержнем,, слегка нажав.
- Перитеции съемки аскоспор разработан 7-10 дней после индукционной терапии при хранении в условиях высокой влажности при 25 ° С с тем же фотопериода.
- Spore сбор производится за счет изменения крышкой Петри пластины, оставляя перитеции снимать в течение ограниченного времени (например, 12 часов) в темноте.
- Стерильная вода добавляется к крышке, приостановление аскоспор, мягко движущейся воды на поверхности.
- Аскоспоры собирают в стерильные пробирки Falcon, мыть и использовать для дальнейшего анализа.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Протокол, представленные здесь, основаны на предыдущих процедур, используемых для производства perithecial Fusarium sрр. (Klittich и Лесли, 1988; Трейл и общие, 2000). Стандартизация процедуры, посредством которой большое количество аскоспор (достаточно для анализа микрочипов) были получены имеет важное значение для воспроизводимости эксперимента. Сообщалось, что экологические факторы, возраст и подложки различия могут изменить биологический характер аскоспор (Beyer и Verreet, 2005). Поэтому использование видео может выявить мелкие детали н...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Авторы выражают благодарность Карен Хилберн за отличную техническую поддержку. Этот проект был поддержан Национальной исследовательской инициативы государства USDA совместных исследований, образования и продлению обслуживания (премия # 2004-35604-14327). Матиас Pasquali поддерживается Бранко Вайса стипендий. Пшеница США и инициатива Ячмень Парша также признал за постоянную поддержку исследований.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| Чашка Петри диаметром 9 cm | Инструмент | |||
| Tween 60 (20%) | Реагент | |||
| Морковный агар (20% w/v органической моркови и 1.5% w/v агара) | Реагент |
Ссылки
- Beyer, M., Verreet, J. A. Germination of Gibberella zeae ascospores as affected by age of spores after discharge and environmental factors. , (2005).
- Francl, L., Shaner, G., Bergstrom, G., Gilbert, J., Pedersen, W., Dill-Macky, R., Sweets, L., Corwin, B., Jin, Y., Gallenberg, D., Wiersma, J. Daily inoculum levels of Gibberella zeae on wheat spikes. Plant Disease 83,662-666. , (1999).
- Goswami, R. S., Kistler, H. C. Heading for disaster, Fusarium graminearum on cereal crops. Molecular Plant Pathology 5,515–525. , (2004).
- Klittich, C. J. R., Leslie, J. F. Nitrate reduction mutants in Fusarium moniliforme (Gibberella fujikuroi. Genetics. 118, 417-2013 (1998).
- Trail, F., Common, R. Perithecium development in Gibberella zeae, a light microscopy study. , (2000).
- Tschantz, A. T., Horst, R. L., Nelson, P. E. A substrate for uniform production of perithecia in Gibberella zeae. Mycologia. , 67-1101 (1975).
- Tschanz, A. T., Horst, R. K., Nelson, P. E. The effect of environment on sexual reproduction of Gibberella zeae. , (1976).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
