Методическая статья

Gibberella zeae аскоспор Производство и коллекция для Microarray эксперименты.

DOI:

10.3791/115

⸱

30 ноября 2006 г.

 , 
1Cereal Disease Laboratory, USDA, 2University of Minnesota/ Agroinnova, University of Torino, 3Cereal Disease Laboratory, University of Minnesota

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Для изучения процессов развития аскоспор в Gibberella zeae, порядок сбора в стерильных условиях снимают с целью получения высокого уровня информации для описания протокола. Это должно способствовать воспроизводимости эксперимента, важный аспект, когда полное выражение проверяет генома профиля реализованы.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fusarium graminearum Швабе (teleomorph Gibberella zeae) является завод патогенный микроорганизм, вызывающий заболевание паршой на пшеницу и ячмень, что снижает урожайность и качество зерна. Ф. graminearum также вызывает стебля и ухо гнилей кукурузы и является производителем микотоксинами, такими как трихотецены, которые загрязняют зерно и вредны для людей и скота (Госвами и Kistler, 2004). Грибок производит два типа спор. Аскоспоры, побегов в результате полового размножения, являются основным источником первичной инфекции. Эти споры принудительно выписали из зрелых перитеции и разносятся ветром (Франкля и др. 1999). Вторичные инфекции, в основном вызваны макроконидий которые производятся бесполым путем на поверхности растения. Для изучения процессов развития аскоспор в этом гриб, порядок их взимания в большом количестве в стерильных условиях не требуется. Наш протокол был снят для того, чтобы генерировать высокий уровень информации для понимания и воспроизводимость; важнейших аспектов при полной профилей генной экспрессии генома создаются и интерпретируются. В частности, изменчивость аскоспор прорастания семян и биологическая активность зависят от предварительного манипуляции материала. Использование видео для документирования каждого шага в аскоспор производства предлагается в целях повышения стандартизации, соблюдения все более строгих требований к анализу микрочипов. Процедура требует лишь стандартным лабораторным оборудованием. Шаги показаны для предотвращения загрязнения и способствуют синхронизации времени аскоспор.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Морковный агар (Klittich и Лесли, 1988) был подготовлен в 9-см в диаметре чашки Петри.
  2. 2 мм куб агара, содержащего свежего мицелия, выращенных на картофельном агаре декстрозы была применена к центру каждой чашке Петри.
  3. Культуры выращивали при 25 ° С и 12-ч фотопериода в течение 96 часов.
  4. Один мл водного 2,5% Твин 60 была применена к поверхности культуры (Trail и общие, 2000) и распределены по культуре с пластиковым стержнем,, слегка нажав.
  5. Перитеции съемки аскоспор разработан 7-10 дней после индукционной терапии при хранении в условиях высокой влажности при 25 ° С с тем же фотопериода.
  6. Spore сбор производится за счет изменения крышкой Петри пластины, оставляя перитеции снимать в течение ограниченного времени (например, 12 часов) в темноте.
  7. Стерильная вода добавляется к крышке, приостановление аскоспор, мягко движущейся воды на поверхности.
  8. Аскоспоры собирают в стерильные пробирки Falcon, мыть и использовать для дальнейшего анализа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол, представленные здесь, основаны на предыдущих процедур, используемых для производства perithecial Fusarium sрр. (Klittich и Лесли, 1988; Трейл и общие, 2000). Стандартизация процедуры, посредством которой большое количество аскоспор (достаточно для анализа микрочипов) были получены имеет важное значение для воспроизводимости эксперимента. Сообщалось, что экологические факторы, возраст и подложки различия могут изменить биологический характер аскоспор (Beyer и Verreet, 2005). Поэтому использование видео может выявить мелкие детали н...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы выражают благодарность Карен Хилберн за отличную техническую поддержку. Этот проект был поддержан Национальной исследовательской инициативы государства USDA совместных исследований, образования и продлению обслуживания (премия # 2004-35604-14327). Матиас Pasquali поддерживается Бранко Вайса стипендий. Пшеница США и инициатива Ячмень Парша также признал за постоянную поддержку исследований.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Чашка Петри диаметром 9 смИнструмент
Твин 60 (20%)Реагент
Морковный агар (20% по объему органической моркови и 1,5% по сравнению с агаром) Реагент

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Beyer, M., Verreet, J. A. Germination of Gibberella zeae ascospores as affected by age of spores after discharge and environmental factors. , (2005).
  2. Francl, L., Shaner, G., Bergstrom, G., Gilbert, J., Pedersen, W., Dill-Macky, R., Sweets, L., Corwin, B., Jin, Y., Gallenberg, D., Wiersma, J. Daily inoculum levels of Gibberella zeae on wheat spikes. Plant Disease 83,662-666. , (1999).
  3. Goswami, R. S., Kistler, H. C. Heading for disaster, Fusarium graminearum on cereal crops. Molecular Plant Pathology 5,515–525. , (2004).
  4. Klittich, C. J. R., Leslie, J. F. Nitrate reduction mutants in Fusarium moniliforme (Gibberella fujikuroi. Genetics. 118, 417-2013 (1998).
  5. Trail, F., Common, R. Perithecium development in Gibberella zeae, a light microscopy study. , (2000).
  6. Tschantz, A. T., Horst, R. L., Nelson, P. E. A substrate for uniform production of perithecia in Gibberella zeae. Mycologia. , 67-1101 (1975).
  7. Tschanz, A. T., Horst, R. K., Nelson, P. E. The effect of environment on sexual reproduction of Gibberella zeae. , (1976).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи