Применение электрофизиологии на доступное синапсов обеспечивает количественной мерой синаптической активности, полезной для анализа синаптических мутантов. В этой статье описывается метод вскрытия используется для предоставления нервно-мышечного соединения (NMJ) из Caenorhabditis Элеганс (C. Элеганс) И кратко рассматриваются некоторые из которых использует для этого препарата могут быть применены.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Разбор и запись с Junction C. Elegans нервно-мышечной
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Нейротрансмиссия это процесс, при котором нейроны передают информацию посредством химических сигналов для их пост-синаптических целей, на быстром масштабе времени. Это сложный процесс, требует скоординированной деятельности многих пред-и пост-синаптические белки для обеспечения надлежащего синаптические связи, проведение электрических сигналов, адресности и грунтовки секреторных везикул, кальция зондирования, слияние везикул, локализация и функции постсинаптических рецепторов и, наконец, утилизация механизмов. Как нейробиологи это наша цель, чтобы выяснить какие белки функционировать в каждом из этих этапов и понимать механизмы их действия. Электрофизиологические записи с синапсы обеспечивают количественные считываются из основных электрических событий, которые происходят во время синаптической передачи. Объединив эту технику с мощными массив молекулярных и генетических инструментов, доступных для манипулирования синаптических белков в C. Элеганс, мы можем проанализировать в результате функциональных изменений в синаптической передачи.
C. Элеганс NMJs образуется между моторных нейронов и стенкой тела мышцы контроль передвижения, таким образом, мутанты с несогласованными двигательного фенотипы (известных как UNC-ы) часто возмущают синаптической передачи на этих синапсов 1. С UNC-мутантов ведутся на богатый запас бактериальных источник пищи, они остаются жизнеспособными, если они сохраняют некоторые глотки насосных способность глотать пищу. Это, вместе с тем, что С. Элеганс существовать как гермафродиты, позволяет им перейти на мутантных потомков без необходимости разработки поведение спаривания. Эти признаки в сочетании с нашей недавней возможностью записи от червей NMJs 2,3,7 сделать это отличная модель организма, в котором для решения, как именно UNC-мутантов воздействием нервных импульсов.
Рассечение метод включает иммобилизации взрослых червей использующих cyanoacrylic клеем, чтобы сделать разрез на червя кутикулы подвергая NMJs. С С. Элеганс взрослых только 1 мм в длину вскрытие производится с использованием микроскопа и рассекает требует отличную координацию рук и глаз. NMJ записи сделаны цельноклеточная напряжения зажима отдельных стенки тела мышечные клетки и нейромедиатор релиз может быть вызвано использованием различных протоколов, включая стимуляцию электрической стимуляции, светло-активированного канала родопсин-опосредованной деполяризации 4 и гиперосмотического солевой раствор, все из которых будут Кратко описаны.
Протокол
А. Подготовка инструментов, используемых для вскрытия.
- Рассечение / записи камеры: Как правило, мы построим нашу запись камеры из 1 / 16 дюйм магнитного листа, с круглым отверстием в центре, что является достаточно большим, чтобы разместить 22 мм диаметр кругового стеклянной крышкой. Внешние размеры камеры будет зависеть от столике микроскопа делали записи. На обратной стороне магнитного листа, мы придаем 48 х 60 мм покровным стеклом, которой мы придерживаемся в камеру, поместив шарик низкой расплава Paraplax ткани вложение воск в каждом углу покровным стеклом зажат между стеклом и камеры . Воск затем таял на горячей плите, стеклянную пластинку ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Генетическая модель организма C, Элеганс идеально подходит для изучения синаптической передачи, через функциональный анализ мутаций в генах, кодирующих синаптических белков. Здесь мы описали рассечение техника, которая делает C. Элеганс NMJs доступными для электрофизиологического анализа. Сопровождающее видео изображены критические шаги в C. Элеганс вскрытие и типичная конфигурация записи, используемые для измерения синаптической активности. Три шага, которые создают больших проблем в процессе.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Эта статья была профинансирована за счет грантов NIH, чтобы JER. Я хотел бы поблагодарить д-ра Алекса Готтшальк за предоставление трансгенных червей выражения канал родопсина в холинергических нейронов двигателя использован в одной из записи демонстраций.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Ссылки
- Brenner, S. Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).
- Richmond, J. E., Davis, W. S., Jorgensen, E. M. Nat Neurosci. 2 (11), 959-959 (1999).
- Richmond, J. E. WormBook. 1, (2006).
- Liewald, J. F., Brauner, M., Stephens, G. J. Nature methods. 5 (10), 895-895 (2008).
- Lockery, S. R., Goodman, M. B. Methods in enzymology. 293, 201-201 (1998).
- Brockie, P. J., Mellem, J. E., Hills, T. Neuron. 31 (4), 617-617 (2001).
- Richmond, J. E., Jorgensen, E. M. Nat Neurosci. 2 (9), 7....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
