Протокол Vaccinia заражения клеток HeLa и анализ хозяина и вирусных экспрессии генов. Часть 1 из 3.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Vaccinia вирусной инфекции и временной анализ вируса экспрессия генов: часть 1
В этой статье
Краткое содержание
Протокол
Часть 1: Настройка инфекции
- Расти HeLa клеток в колбах и ждать, пока клетки приблизительно на 80% вырожденная.
- Подготовка достаточно вирусных питательную среду для эксперимента: регулярные DMEM с 2% ЭТС и без добавления антибиотиков.
- Инфекция может быть выполнена либо с сырой запасов вируса коровьей оспы с известным титром, или сахароза очищенный вирус с известным титром, если вы беспокоитесь о хост экспрессии генов.
- Если вы используете сахарозы очищенный вирус, переходите к части 2.
- Если вы используете сырой вируса коровьей оспы акций, непосредственно перед инфекцией, разрушать ультразвуком аликвоты вируса в чашку s....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Критические Шаги
Часть 1 и 2
Есть несколько важных шагов для создания синхронной инфекции вакцины, первая из которых осторожны ультразвуком (или trypzinizing) вируса, чтобы разбить вирусных частиц. Vaccinia очень склонны к агрегирования, и нарушение вирусных частиц имеет важное значение для обеспечения даже заражение клеток. Для того чтобы добиться синхронного инфекции, высокая МВД (больше 2) должна быть использована для обеспечения каждой клетки инфицированы. Смесь з.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Уайтхед Институт стипендиаты фондов
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| Реагент TRIzol | Реагент | Invitrogen | 15596-026 | Также подойдут аналогичные реагенты, такие как TriPure от Roche. |
| Реагент для разделения фаз BCP | Реагент | Molecular Research Center | BP151 | |
| Набор DNase, не содержащий РНказ | Реагент | Qiagen | 79254 | Обработка DNase является дополнительным этапом. |
Ссылки
- KH, R. ubins, LE, H. ensley, GW, B. ell, Wang, C., EJ, L. efkowitz, PO, B. rown, DA, R. elman Comparative analysis of viral gene expression programs during poxvirus infection: a transcriptional map of the vaccinia and monkeypox genomes. PLoS ONE. 3 (7), e2628-e2628 (2008).
- Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
