Стоматогастральных нервной системы (ст.) из краба Иона ( С. Borealis) Может быть использован для электрофизиологии, иммуногистохимии, и исследования клеточных культур. Добыча ст. делается из двух частей: общей и мелкой рассечение.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Рак Borealis стоматогастральных нервной системы Dissection
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Стоматогастральных ганглии (STG) является прекрасной моделью для изучения клеточных и сетевые взаимодействия, поскольку она содержит относительно небольшое число клеток (примерно 25 в С. сияние), которые хорошо охарактеризованы. Клеток в STG выставке широкий спектр выходами и несут ответственность за двигательным действиям желудка. Желудок содержит желудочный мельница который расщепляет пищу с тремя внутренними зубами, и привратника, который фильтрует пищу, прежде чем попасть кишки. STG производит два ритмических выходов для управления желудочной мельницы и привратника известный как центральные генераторы шаблон (CPGs). Каждая ячейка в STG может принять участие в одном или обоих этих ритмов. Эти CPGs позволяют изучение нейромодуляции, гомеостаз, сотовой сети и изменчивость, развитие сети и сетевые восстановления.
Рассечение стоматогастральных нервной системы (ст.) из краба Иона (Рак сияние) осуществляется в два этапа; общей и мелкой рассечение. В валовом рассечение всей желудка рассекается из краба. Во время вскрытия штраф ст. извлекается из желудка с помощью микроскопа рассечение и микро-рассечение инструментов (см. рисунок 1). Ст. включает STG, пищевода ганглии (ОГ) и спаечный ганглиев (ЦТ), а также нервы, которые иннервируют мышцы живота. Здесь мы покажем, как выполнить полное рассечение ст. при подготовке эксперимента электрофизиологии, где клетки в STG будет записан с внутриклеточно и периферических нервов будет использоваться для внеклеточных записей. Правильную технику для поиска нужной нервы показано, а также наши техники desheathing ганглия выявить somata и нейропиля.
Протокол
1. Валовой Dissection
- Место краба на льду в течение 30 минут, чтобы притупить сенсорных и моторных систем животного. Его окружают со всех сторон льдом. Перчатки должны быть надеты при обработке краба.
- Подготовка к валовой вскрытия путем прокладки из кастрюли вскрытие и инструменты вы будете использовать. Rongeurs, косторезное ножницы, маленькие ножницы, зубчатые щипцы, лопаточки с коническим краем, черный Sylgard покрытием блюдо, и насекомое контакты необходимы.
- Удалить из краба ведерко со льдом за задние ноги, чтобы он не щипать и поместите ее в кастрюлю рассечение.
- Удаление когтей первых, повернув каждый внутрь. Затем удалит....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Рассечение ст. является первым шагом в выполнении электрофизиологии или иммуногистохимии эксперимент, или для получения клеток для клеточной культуры. Независимо от того, предназначена эксперимент, валовой рассечение останется без изменений. Тем не менее, прекрасно вскрытия могут быть различными. Важно планировать заранее, какие клетки и нервы которых вы будете запись. Большинство нейронов в STG имеют процессы, которые иннервируют по крайней мере одна мышца живота (см. рисунок 2) и классифицируются в соответствии с их ц.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Мы выражаем глубокую признательность членам Лаборатории Мардер. Мы благодарим наших советник, доктор Ева Мардер, за ее поддержку и поощрение. Работа выполнена при поддержке Национального института неврологических расстройств и инсульта Гранты NS-17 813 и NS-058 110.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| Черный Sylgard 170 | Прочее | Dow Corning | 170 | Грубая диссекция |
| Тонкие ножницы | Хирургия | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Энтомологические булавки, размер 6 | Хирургия | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Ножницы Мэйо | Хирургия | Fine Science Tools | 14110-17 | |
| Микрошпатель | Хирургия | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | |
| Кусачки (ронжёры) | Хирургия | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Тканевый пинцет | Хирургия | Fine Science Tools | 11021-12 | |
| Тонкая вольфрамовая проволока (диаметром 0.001 in.) | Хирургия | California Fine Wire Company | Тонкая диссекция | |
| Пинцет №5 | Хирургия | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Минутен-булавки | Хирургия | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Пружинные ножницы Moria (лезвия 7 mm) | Хирургия | Fine Science Tools | 15370-52 | |
| Чашка Петри (100x15 mm) | Прочее | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| Держатель для булавок | Хирургия | Fine Science Tools | 26018-17 | |
| Сверхтонкий пинцет №5SF | Хирургия | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Sylgard 182 | Прочее | Dow Corning | 182 | |
| Вольфрамовые иглы | Хирургия | Fine Science Tools | 10130-05 | |
| Диссекционный микроскоп | Микроскоп | Wild | MC3 | Разное |
| Краб-камчатка (C. borealis) | Животное | Commercial Lobster |
Ссылки
- Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system. , MIT Press. Boston. (1992).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.<....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
