Методическая статья

Создание мышей экспериментальной аневризмы брюшной аорты с эластазы

DOI:

10.3791/1280

⸱

23 июля 2009 г.

 ,  ,  , 
1Department of Cardiovascular Medicine, Stanford University School of Medicine, 2Department of Vascular Surgery, Stanford University School of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это видео показывает, как вызвать аневризмы брюшной аорты (ААА) у мышей с помощью переходных внутрипросветный вливание эластазы поджелудочной железы свиньи в инфраренального сегмент брюшной аорты. Модель имеет возможность добавлять широкий понимание патобиологии AAA в связи с появлением многочисленных трансгенных мышей и гена нокаутом.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Переходные внутрипросветный вливание эластазы поджелудочной железы свиньи в инфраренального сегмент брюшной аорты является наиболее широко используемой модели животных аневризмы брюшной аорты (ААА) с тех пор как он был впервые описан у крыс Anidjar и коллег. 1 обоснованием для его развития была основана по нарушается характер эластина наблюдается в Зенитных орудий. Это крыса модель была модифицирована для производства Зенитных орудий в инфраренального области аорты мышей. 2 модели имеет возможность добавить широкую понимание патобиологии AAA в связи с появлением многочисленных трансгенных мышей и гена нокаутом. Более того, жизнеспособную платформу для тестирования потенциальных терапевтических агентов для AAA. В этом видео, мы демонстрируем эластазы инфузии AAA процедура, используемая в нашей лаборатории.

Мыши наркозом использованием 2,5% изофлуран и лапаротомии осуществляется в стерильных условиях. Брюшной aortais изолированы с помощью операционной стереомикроскопа (Leica). После размещения временных лигатуры вокруг проксимальных и дистальных аорты, aortotomy создается в области бифуркации с кончика 30-иглы. Тепло-конический сегмент ПЭ-10 полиэтиленовые трубы вводится через aortotomy и закреплены. Просвет аорты впоследствии перфузии в течение 5-15 минут при 100 мм рт физиологическим раствором содержащего типа я свиной поджелудочной эластазы (4,5 Ед / мл, Sigma Chemical Co.) После удаления катетера перфузии, aortotomy отремонтирован без сужения просвета.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Мыши анестезии ингаляционными изофлуран 2,0-3.0ml / L.
  2. Живот побрился и удалено с алкоголем и бетадин.
  3. Мышь находится на спине на операционном поле.
  4. Стерильные перчатки носят хирургом, и инструменты, используемые были стерилизованы горячим стерилизатор шарик.
  5. Долго средней линии брюшной надрез. Брюшной содержимое убираются вне брюшной полости стерильной марли, чтобы разоблачить брюшной аорты.
  6. Брюшной аорты изолирован от уровня левой почечной вены до развилки.
  7. Ветвей брюшной аорты подвержены и лигировали с 10-0 швов. Все аорты ветвях в пределах 1,0 см от бифуркации лигировали.
  8. Временные 6,0 лигатуры шелка расположены вокруг проксимальных и дистальных отделов аорты
  9. Aortotomy создается в области бифуркации с 30-иглы.
  10. Тепло-конических полиэтиленовых труб (ПЭ-10) вводится через aortotomy и закрепляется с галстуком.
  11. Использование солевых мешок висел на высоте 136 см для калибровки 100 мм рт.ст., аорты заполнен солевым содержащий 4,5 Ед / мл Тип I свиной поджелудочной эластазы. Аорты обычно расширяется до 150-170% от своего первоначального диаметра в течение 5-15 минут эластазы перфузии.
  12. Перфузии катетер удаляется и aortotomy закрыта с 10-0 шва, чтобы избежать сужения.
  13. После aortotomy закрыт, дистальной лигатуры удаляется.
  14. Если нет или почти нет кровотечения из отремонтированных aortotomy, проксимальных лигатуры удаляется. Расширены аорты наполняется кровью немедленно.
  15. Кишечник возвращаются в брюшную полость, и рана закрыта в два слоя с 6-0 нейлон / полипропилен шва.
  16. 0,25% Bupivicaime капель (appx одной капле за каждый сантиметр разрез размером) размещены на раны и одну дозу Caprofen (5mg/kg) дается подкожно.
  17. Мыши помещается на теплое место и обычно восстанавливается в течение 15 минут.

figure-protocol-1
Рисунок 1. Представителю Результат эластазы индуцированных ААА.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Предыдущие исследования отметили значительные партии к много изменений в ААА развития различных коммерческих препаратов эластазы 3. Таким образом, очень важно следить партий изделий, а также иметь соответствующие контрольные группы для того, чтобы документ способность подготовку, чтобы побудить Зенитных орудий.

Интересно, что восприимчивость к AAA развития в этой модели зависит от мыши штамма использовали 3. Мыши, используемые в текущий видео из C57Bl / 6 штамм, который...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют конфликтов интересов, подлежащих раскрытию.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Работа выполнена при поддержке гранта SCCOR "AAA заболевания: механизмы, стратификация, и лечение» (P50 HL083800-03) из Национального института здоровья

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Панкреатическая эластаза свиньи I типаРеагентSigma-AldrichE1250
полиэтиленовые трубки (PE-10)BD Biosciences427400
ЗАМЕНА НАКОНЕЧНИКАBovie Medical Corporation18010-00 (FST)электрокоагуляторный нож
LEICA MZ6Leica Microsystemsстереомикроскоп
LEICA DFC290HDLeica MicrosystemsUSB-камера
Image Pro Express вер. 6.0Media Cybernetics Inc.программное обеспечение

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
  2. Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
  3. Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи