Это метод генерации гиногенетических диплоидных эмбрионов данио рерио (эмбрионы, единственный генетический вклад происходит от матери), блокируя второго деления мейоза сразу после оплодотворения ультрафиолетовым светом инактивированная сперма. EP эмбрионы не являются полностью гомозиготных из-за рекомбинации во время первого деления мейоза, однако они гомозиготных по всем локусам, которые не были отделены от их центромеры рекомбинации.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Создание данио рерио гиногенетических диплоидных на ранних давления
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Гетерозиготности диплоидных эукариот часто делает генетические исследования громоздким. Методы, которые производят жизнеспособные диплоидные гомозиготные потомства непосредственно от гетерозиготных женщин позволяют F1 мутагенизированных женщин пройти обследование непосредственно для вредных мутаций в ускоренном вперед генетические экране. Streisinger и соавт.
Протокол
Обзор ранних давления
Примечание: рецепты для многих из реагентов, используемых в этом протоколе, такие как tricaine, рыбу водой и солевым Хэнкс можно ознакомиться в Интернете в главе 10 данио рерио Книга 3 ( http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html )
- Продукция эмбрионов путем экстракорпорального оплодотворения с помощью УФ инактивированная сперма.
- Сразу же передаче оплодотворенных яйцеклеток, чтобы стекло флакона (с пластиковой крышкой оснастки), заполненной до краев яйцом воды. Обложка открытый конец флакон с тонким слоем латекса каучука и оснастки ве....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Важно, чтобы убедиться, что эмбрион, полученный с помощью этого метода верны диплоиды гиногенетических. В качестве контроля генерировать сцепление нормальных диплоидных яиц (в сторону, сохраняя некоторые из спермы без УФ-инактивации) и сцепление гаплоидных эмбрионов (в сторону, сохраняя сцепление яйца оплодотворены спермой УФ минуя процедуру EP). На 1 день после оплодотворения эмбрионы имеют гаплоидный короткой оси тела, мозга и нерегулярные сомитов морфологии. Гаплоидов не являются жизнеспособными через 2-3 дня. EP дип.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Методы искусственного оплодотворения и гиногенетических диплоиды были разработаны для рыбок данио по Charline Уокер в лаборатории Джорджа Streisinger в Университете штата Орегон в 1970-х и 1980-х. Метод, описанный здесь не претерпела изменений с протоколами Charline, которые доступны в полном объеме в Книгу данио рерио 3.
Методы искусственного оплодотворения и гиногенетических диплоиды были разработаны для рыбок данио по Charline Уокер в лаборатории Джорджа Streisinger в Университете штата Орегон в 1970-х и 1980-х. Метод, описанный здесь не претерпела изменений с протоколами Charline, которые доступны в полном объеме в Книгу да....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Трикаин | Sigma-Aldrich | ||
| Часовое стекло | |||
| Френч-пресс | |||
| Газовый баллон | |||
| Instant Ocean | |||
| Пипетки Пастера | Отрежьте узкий конец, подвергните огневой полировке | ||
| УФ-кросслинкер | |||
| микрокапилляры |
Ссылки
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. Genetics. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Weste....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
