Методическая статья

Препарирование 6,5 Эмбрионы DPC мышь

DOI:

10.3791/160

⸱

25 февраля 2007 г.

 , 
1Massachusetts General Hospital, Harvard Stem Cell Institute, Harvard Medical School

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Выделение постимплантационных стадии эмбрионов позволяет исследовать геном структурирования и анализа клеточных линии процессах принятия решений во время эмбрионального развития, но надлежащего вскрытия раннего эмбриона может оказаться непростой задачей. Этот протокол описывает метод выделения ранних примитивных-штрих стадии эмбрионов (~ 6,5 дней после coitum [DPC]).

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Анализ моделей экспрессии генов на ранних стадиях эмбрионального развития млекопитающих может предоставить важную информацию о функции гена, межклеточных взаимодействий и сигнальных механизмов, которыми руководствуются эмбриональных кучность стрельбы. Тем не менее, рассечение эмбриона мыши с децидуальной вскоре после имплантации может быть сложной процедурой, а также подробные шаг за шагом документации этого процесса отсутствует.

Здесь показано, как после имплантации (6,5 DPC) эмбрионы выделяли первых рассекает матку беременных мышей (обнаружение вагинальные плагин был назначен день 0,5 poist coitum), а затем рассекает эмбриона от материнского децидуальной. Рассечение мембраны Reichert это описано, а также удаление ectoplacental конуса.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Препарирование репродуктивных органов у женщин мыши

  1. Беременных животных усыпляют СО 2 удушение с помощью сжатого газа.
  2. Положите животное на спине на абсорбирующую прокладку и положите его в 70% этанола, чтобы уменьшить риск загрязнения вскрытия с помощью мыши волос.
  3. Сожмите кожу и сделать небольшой боковой разрез на средней линии с регулярными хирургические ножницы. Держите кожу твердо выше и ниже разреза и потяните кожу в разные стороны в сторону головой и хвостом, чтобы разоблачить живота.
  4. Возьмитесь брюшины щипцами и сократить, чтобы разоблачить брюшной полости.
  5. Найдите репродуктивных органов в грудном отделе полости тела: два рога матки, маточных труб и яичников.

Примитивные подряд стадии (6,5 DPC) Препарирование

  1. Удалить рога матки, держа матки ниже яйцевода и разрезать его свободным вдоль mesometrium. Место расчлененный матки в ледяной PBS.

    figure-protocol-1

    Рисунок 1

  2. Отдельные каждого эмбриона, сокращая между имплантации участков вдоль рога матки.

    figure-protocol-2

    Рисунок 2


  3. Возьмитесь мышечной оболочки матки, сдвинув пинцетом часовщика в период с окружающим слоем мышц и тканей децидуальной окутан. Пил назад мышечного слоя, обнажая децидуальной.

    figure-protocol-3

    Рисунок 3

  4. Клип от части обнаженной децидуальной на вершине (примерно 1 / 5 часть децидуальной ткани), которая подвергнет midventral или дистального кончика заключен зародыш.

    figure-protocol-4

    Рисунок 4

  5. Эмбриона могут быть обстреляны с помощью кончиков пинцета. Пирс децидуальной щипцами окружающих эмбрион и открытые щипцы рвать децидуальной друг от друга.

    figure-protocol-5

    Рисунок 5

  6. Как только эмбрион удаляется, мембранные Reichart может все еще быть прикреплен, а также конус ectoplacental (трофобласта). Эмбриона можно разрезать дальнейшего тщательного вскрытия.

    figure-protocol-6
    Рисунок 6

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Постимплантационных у мышей происходит между 4,5 DPC и рождения. Это рассечение метод может быть применен, по существу, как описано, чтобы изолировать раньше или поздней стадии эмбрионов на 5.5-8.5 DPC.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Микрохирургический пинцет для диссекции, зубчатый, прямойИнструментRoboz Surgical Instruments Co.RS-51302 пары
Микродиссекционные пинцеты, модель №55, INOXИнструментКомпания по производству хирургических инструментов Roboz Surgical Instruments Co.RS-50102 пары
Дюльбеко’фосфатно-солевой буферный раствор (1x)РеагентInvitrogen14190
Стерильная полистирольная чашка Петри FisherbrandИнструментFisher Scientific08-757-12
4% параформальдегид в PBSРеагент
Прямые остроконечные диссекционные ножницыИнструментFisher Scientific08-940
Беременные самки мышей Животное
Диссекционный микроскопМикроскоп

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

in situBMP4

Похожие статьи