$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1.Настройка магнитного поля с помощью одномерной манипуляции с магнитным полем
- Включите блок питания (Рисунок 1А).
- Поместите спиральный туннель в место, где будет выполняться реотаксический протокол (раздел 3), но не отключайте его от плавательного аппарата (рисунок 1A). Поместите магнитный зонд, соединенный с гауссометром/Тесламетром, внутрь туннеля и проверьте, какое напряжение необходимо для получения выбранного значения магнитного поля вдоль большой оси туннеля.
ПРИМЕЧАНИЕ: Из-за магнитных свойств соленоида поле внутри туннеля достаточно однородно; Это можно проверить, медленно перемещая щуп как по горизонтали, так и по вертикали.
- Отсоедините щуп и подсоедините проточный канал к плавательному аппарату.
- Начните с реотаксического протокола (раздел 3).
2. Настройка магнитного поля с помощью манипуляции с трехмерным магнитным полем
- Включите процессор, ЦАП и драйверы катушек (рис. 1B).
- Установите выбранное магнитное поле на каждой из трех осей (x, y и z).
- Поместите тоннель в центр набора пар Гельмгольца.
- Начните с реотаксического протокола (раздел 3).
3. Испытание реотаксиса данио-рерио в проточной камере
- Пересадите от одной до пяти рыб в проточный туннель с помощью резервуара объемом 2 л с закрытыми стенками и дном.
- Включите насос и установите расход в тоннеле на 1,7 см/с.<бр/>
заметка: Эта медленно движущаяся вода будет поддерживать насыщение воды в туннеле кислородом и будет способствовать выздоровлению животных.
- Дайте животным акклиматизироваться в плавательном туннеле в течение 1 часа.
- Запустите видеозапись поведения рыбы в тоннеле.
заметка: Мы использовали камеру (например, Yi 4K Action) с дистанционным управлением (например, Bluetooth) и сохраняли видео как .mpg (30 кадров/с).
- Начать ступенчатое увеличение расхода в соответствии с выбранным протоколом эксперимента (1,3 см/с в данном исследовании; Рисунок 2).
ПРИМЕЧАНИЕ: Для этого протокола мы использовали низкие скорости потока, которые для рыбок данио варьируются от 0 до 2,8 BL (длина тела)/с. Эти скорости течения находятся в нижнем диапазоне скоростей течения, которые вызывают непрерывное ориентированное плавание у рыбок данио (3–15% от критической скорости плавания). Использование низких скоростей течения (в соответствии с протоколом Бретта) связано со специфическими поведенческими особенностями этого вида в присутствии водных течений. Рыбки данио, как правило, плавают вдоль главной оси камеры, часто поворачивая, даже при наличии потока воды, и имеют тенденцию плыть как вверх, так и вниз по течению. На это поведение влияет скорость потока воды, исчезающая при относительно высоких скоростях (>8 BL/s), когда животные непрерывно плавают лицом вверх по течению (полная положительная реотаксическая реакция). Вертикальные и поперечные смещения встречаются очень редко.
- Проведите морфометрию животных (пол и общая длина [TL], длина вилки [FL] или BL) на изображениях рыб в морфометрической камере.
- Выберите подходящую картинку.
- Откройте изображение в программе ImageJ.
- Обратите внимание на пол животного (самцы данио-рерио стройные и, как правило, желтоватые, в то время как самки более округлые и, как правило, имеют голубую и белую окраску).
- Нажмите кнопку Анализ > Задать масштаб и установите масштаб изображения в сантиметрах, используя всю горизонтальную длину туннеля в качестве ориентира.
- Нажмите кнопку Анализ > Измерить и запишите линейную длину животного.
- Рассчитайте его массу тела (BW).
заметка: МТ рассчитывается на основе отношений «пол-ФЛ-ЧБ», ранее построенных в лаборатории, или на основе метаданных. Вся процедура позволяет избежать манипуляционного стресса для животных.
