1. Калибровка параметров видеослежения
- Перед проведением поведенческих измерений задайте параметры наблюдения и калибровки в программном обеспечении видеотрека (см. Таблицу материалов).
- Поместите в камеру записи луночную пластину с не менее чем 1 личинкой рыбы в отдельной лунке. Используйте пластину и связанную с ней рыбу в качестве представлений для установки параметров калибровки.
- В программе для видеодорожек нажмите «Файл | Generate Protocol", которое откроет диалоговое окно "мастер создания протокола". В поле «Количество местоположений» введите количество отдельных скважин пластины скважины и нажмите «ОК».
- В верхней части экрана нажмите «Просмотр | Полноэкранный режим», который предложит системе отобразить вид с камеры сверху на пластину скважины.
- Нажмите на значок «Нарисовать области», который отображается в виде трех разноцветных фигур. Справа от области просмотра пластины скважины выберите значок круга в поле с надписью «Площади».
- С помощью курсора очертите круглую область видеослежения в верхнем левом углублении пластины луночного колодца. Выберите «Отметка вверху-справа», а затем обведите область просмотра верхнего правого колодца. Затем выберите "Нижняя отметка", чтобы обвести нижний правый круг><.
ПРИМЕЧАНИЕ: После рисования круглого контура, скорее всего, потребуется скорректировать его положение. Чтобы настроить положение контура, нажмите "выбрать", а затем переместите очерченную область с помощью курсора. Кроме того, контуры можно повторить, нажав «Копировать», а затем «Вставить».
- После того, как верхние левые, верхние правые и нижние правые области слежения за скважинами будут определены, нажмите «Построить», чтобы предложить программному обеспечению автоматически разграничить области обзора оставшихся скважин.
- В области с надписью «Калибровка» нажмите «Нарисовать шкалу». С помощью курсора нарисуйте горизонтальную линию поперек пластины. Как только линия будет нарисована, появится диалоговое окно с надписью «Калибровочное измерение». Введите длину луночной пластины и нажмите «OK».
- Выйдите из диспетчера рисования, нажав на иконку «Области рисования».
- Нажмите на иконку "Плитки". С помощью курсора выделите все поля, которые появятся на экране просмотра, так, чтобы каждая коробка была зеленого цвета.
ПРИМЕЧАНИЕ: Значок плитки отображается в виде группы из шести отдельных маленьких квадратов
- «Нажмите «Просмотр»| На весь экран». Справа от области просмотра пластины нажмите "Bkg" в поле с надписью "Порог обнаружения". Используйте панель регулировки порога, чтобы установить порог обнаружения пикселей. После выбора соответствующего порога обнаружения пикселей нажмите "Применить к группе".
ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол устанавливает порог обнаружения на уровне 13 в черном режиме для наблюдений за рыбками данио и на уровне 110 в прозрачном режиме для наблюдений за толстоголовым гольяном.
- В поле с надписью «Порог движения» введите желаемые параметры отслеживания скорости движения. После того, как параметры скорости установлены, нажмите "Применить к группе".
ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол устанавливает маленькие/большие движения со скоростью 20 мм/с и неактивные/малые движения со скоростью 5 мм/с. Эти выборки программируют программное обеспечение для отслеживания движения личинок рыб на трех различных уровнях скорости: неактивное (замерзание) = <5 мм/с, маленькое (круизное) = 5–20 мм/с и большое (лопающееся) = >20 мм/с.
- Нажмите "Параметры | Параметры протокола» из выпадающего меню. В диалоговом окне выберите вкладку "Время". Введите время наблюдения и время интеграции. После ввода параметров нажмите «Ок».
- Чтобы установить время светлого/темного фотопериода и интенсивность света для каждого фотопериода, откройте диалоговое окно настроек драйвера света, выбрав «Легкое вождение» в выпадающем меню «Параметры».
ПРИМЕЧАНИЕ: Смотрите видео протокола для настройки нескольких светлых и темных фотопериодов.
- После того, как параметры видеослежения были установлены, сохраните протокол наблюдения.
ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол наблюдает за поведением рыбы в течение 50-минутного периода, который включает в себя 10-минутную фазу акклиматизации, за которой следуют 4 меняющиеся светлые и темные фазы, состоящие из двух 10-минутных светлых периодов и двух 10-минутных темных периодов. Время интеграции установлено для измерения поведения для каждой минуты 50-минутного поведенческого испытания.
2. Наблюдение за локомоторным и фотомоторным поведением личинок рыб
- Поместите луночную пластину с подопытными рыбами в камеру регистрации поведения.
- В программном обеспечении для отслеживания видео откройте протокол отслеживания, разработанный на следующем шаге.
- В просмотрщике видеослежения убедитесь, что все личинки видны на экране компьютера, что в каждой лунке присутствует только одна отдельная личинка, и что отдельные лунки выровнены в пределах зон наблюдения, определенных в шагах 1.1.5 и 1.1.6.
- Нажмите на кнопку "Экспериментировать | Выполнить".
ПРИМЕЧАНИЕ: Система попросит пользователя указать имя и местоположение для сохранения данных наблюдения.
- После того, как вы указали имя и место сохранения данных наблюдения, нажмите на значок «Несколько изображений в реальном времени», чтобы выделить все предварительно определенные зоны просмотра
ПРИМЕЧАНИЕ: Этот значок расположен в верхней части экрана компьютера и выглядит в виде поля, разделенного на четыре меньших квадрата. При нажатии на этот значок будут выделены все предопределенные области просмотра.
- Закройте панель камеры записи и нажмите кнопку "Фон | Пуск» на мониторе компьютера.