Тест предпочтений светло-темного света: метод изучения тревожного поведения у рыбок данио

Аннотация

Источник: Holcombe, A., et al. Новый метод введения лекарств для нескольких рыбок данио-рерио (Danio rerio) и количественная оценка отмены. J. Vis. Exp.(2014)

В видео описывается анализ предпочтений светло-темного для изучения тревожного поведения у рыбок данио-рерио после воздействия этанола.

Протокол

1. Поведенческое тестирование

1. Получите светлую/темную арену шириной 9,5 см, длиной 55 см и глубиной 9,5 см с белым водонепроницаемым полом (Рисунок 1B). Прикрепите белую и черную водонепроницаемую неотражающую бумагу к внутренним стенам арены с помощью липучки, при этом половина арены должна быть покрыта белым, а половина - черным. Заполните арену на глубину 5 см водой для обитания с температурой 25-28 °C. Поддерживайте эту температуру на протяжении всего тестирования.
2. Сведите к минимуму внешние визуальные стимулы, построив белое трехстороннее ограждение, в котором будет расположена арена. Убедитесь, что в зоне тестирования имеется диффузное верхнее освещение, которое не вызывает отражений на поверхности воды, но при этом достаточно яркое для программного обеспечения для отслеживания движений или специальной ручной количественной оценки по видеоизображениям.
3. Поместите арену в вольер и установите параметры записи и анализа движений программного обеспечения для отслеживания поведения. Установите продолжительность исследования равной 5-15 минутам, в зависимости от исследовательского вопроса.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь мы использовали 5 минут.
4. Транспортируйте группу рыб, подлежащих тестированию, в исследовательскую зону в резервуаре для обитания и размещайте их за пределами ограждения арены. Акклиматизируйте рыбу в течение 10 минут.
5. Аккуратно вытащите рыбу из соответствующей группы и поместите в центр светлой/темной арены, обязательно отпуская рыбу, когда она расположена параллельно длинной оси арены, чтобы избежать смещения рыбы в светлую или темную зону.
6. Начинайте записывать поведение сразу после того, как животное будет выпущено. Следите за любыми программными проблемами с отслеживанием рыбы, а также за прыжками или замерзанием рыбы. Поверните арену на 180° после того, как половина испытуемых будет протестирована, чтобы предотвратить любые искажения из-за смещений, возникающих в результате того, что конец арены ориентирован в сторону открытого конца корпуса.
7. После того, как испытание закончится, аккуратно зачистите рыбу сетями и переместите рыбу из арены в резервуар для содержания или аквариум для обитания.

2. Анализ

1. Изучите время, проведенное в светлых и темных зонах. Для каждой группы и каждой рыбы получите относительное время, проведенное в светлой и темной зонах, и проанализируйте с помощью t-критерия с одной выборкой (или рангового теста Вилкоксона со знаком Вилкоксона для непараметрических данных; разница с (половина общего времени испытания) 150 секунд), чтобы определить, значительно ли группы предпочитают одну область другой.
2. Чтобы сравнить предпочтения, рассчитайте индекс предпочтений, вычитая время, проведенное в светлой зоне, из времени, проведенного в темной зоне, и сравните различия между группами. Сравнивайте несколько групп с помощью одностороннего дисперсионного анализа с использованием апостериорного теста HSD Тьюки, где это необходимо (или теста Краскела-Уоллиса с апостериорным тестом множественного сравнения Данна для непараметрических данных).
3. Сравните скорость, количество переходов между зонами, извилистость и неподвижность в группах. Используйте односторонний дисперсионный анализ с использованием апостериорного критерия HSD Тьюки, где это необходимо (или критерий Краскела-Уоллиса с апостериорным критерием множественного сравнения Данна для непараметрических данных).

Результаты

Рисунок 1: Процедура переноса и арена Свет/Тьма. Эти фотографии иллюстрируют процедуру пересадки. (А) Во-первых, рыбы находятся в пересадочном аквариуме (слева). Дозирующий резервуар, содержащий этанол, изображен (справа). (B-C) Перемещение рыбы из передаточного резервуара в раствор этанола требует, чтобы исследователь вытащил нерестовую вставку, вытащив ее из передаточного резервуара в ...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Светлая/Темная арена	обычай		Конструкция в соответствии с описанием процедуры. 9,5 см шириной, 9,5 см глубиной, 55 см длиной.
Трехполочная настольная система корпусов	Водные места обитания	Н/Д
1,5 л Нерестовый бак с перегородкой 400 мкм	Водные места обитания	Н/Д
Программное обеспечение для отслеживания движения Ethovision XT	Информационные технологии Noldus
Этанол из чистого зерна	Люкско, ИНК	Н/Д