Избегание рыбок данио и анализ тигмотаксиса: высокопроизводительный метод изучения поведения личинок в ответ на аверсивный визуальный стимул

Abstract

Источник: Richendrfer, H., et al. Автоматизированный высокопроизводительный поведенческий анализ личинок данио-рерио. J. Vis. Exp.(2013)

В видео описывается метод предотвращения и анализ тигмотаксиса личинок рыбок данио. В видео рассматривается поведение личинок рыбок данио в ответ на визуальный аверсивный стимул.

Protocol

1. Захват изображения

1. В каждой полосе пластин может быть размещено до 20 личинок. Обычно используется 5 личинок на дорожку, чтобы облегчить наиболее точное отслеживание скорости плавания и уменьшить количество личинок, необходимых для эксперимента. Дорожки могут быть заполнены яичной водой с фармацевтическими препаратами или токсикантами или без них, в зависимости от эксперимента. Тем не менее, полосы не должны быть заполнены до тех пор, пока они не будут размещены в шкафах для визуализации; Это предотвратит переполнение. Для консистенции личинки должны иметь период акклиматизации в течение десяти минут после того, как они будут помещены в агарозные формы и размещены на верхней части экрана ноутбука. Эффективное перемещение личинок из чашки Петри в агарозную дорожку поможет снизить стресс личинок. Это проще всего, когда личинки размещаются в неглубоких резервуарах или чашках Петри.
2. Шкафы для обработки изображений включают в себя цифровую камеру Canon, используемую для цейтраферной фотосъемки, и ноутбук. Камера должна быть размещена в верхней части корпуса и направлена в нижнюю часть корпуса, где должен быть размещен ноутбук с 15,6-дюймовым экраном экраном вверх (Рисунок 1). Четыре пластины должны быть расположены вручную непосредственно над экраном ноутбука. В это время дорожки могут быть покрыты яичной водой или химической обработкой, чтобы они были на уровне верхней части дорожки (для устранения теней по краям дорожек на изображениях).
3. Презентация PowerPoint используется в качестве отталкивающего стимула для личинок. В прошлом личинкам данио-рерио показывали движущиеся красные шары в 6 или 12 многолуночных планшетах. Текущий PowerPoint начинается с пустого белого фона в течение 15 минут, за которым следует 15 минут движущейся красной полосы в верхней половине пластины (рисунок 2). Для того чтобы исключить перегрев личинок, лучше всего приобрести ноутбук с температурой экрана, которая не поднимается выше 28 °C. Чтобы избежать испарения жидкости в пределах агарозных дорожек, максимальное время визуализации должно быть не более одного часа.
4. Цифровая камера должна быть запрограммирована на покадровую съемку, делая снимки каждые 6 секунд, что в общей сложности составляет 300 изображений за эксперимент. Тем не менее, частота и продолжительность могут быть скорректированы в зависимости от эксперимента и поведенческой количественной оценки. В прошлом использовалось увеличенное время визуализации с использованием более длительных интервалов между каждым изображением. Камеру можно настроить на более низкое разрешение для получения изображений со скоростью видео (30 кадров в секунду). В то время как более низкое разрешение ограничивает записи одной многолуночной пластиной, видеозаписи подходят для визуализации соревнований по быстрому плаванию.

Results

Рисунок 1. Шкафы для визуализации. Шкафы для визуализации были специально изготовлены в нашей лаборатории и используются для высокопроизводительного поведенческого анализа. 15-мегапиксельная цифровая камера была прикреплена к верхней части корпуса лицевой стороной вниз, чтобы собирать покадровые изображения личинок в многорядных пластинах, размещенных поверх экрана ноутбука. Между пластинами и экраном находится пластиков...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Шкафы для визуализации	Деревянные башни
агароза	рыбак	БП1356-100
Цифровой фотоаппарат	Canon EOS	Бунтарь T1i
Ноутбуки	Acer Aspire		Любой хорош, если у него 15,6 дюйма. ЖК-экран с разрешением 1366 x 768 пикселей и яркостью 220 кд/м2.
Пластины с одной лункой	рыбак	Тел.: 12-565-493
PowerPoint 2010	Майкрософт
Пластиковый диффузор	Пендафлекс	No 52345