Крепление агара: основной метод монтирования живых эмбрионов данио-рерио для долгосрочной визуализации

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Hagedorn E. J., et al. Генерация парабиотических эмбрионов данио-рерио путем хирургического слияния развивающихся бластул. J. Vis. Exp. (2016).

Это видео описывает пошаговые инструкции по установке живых эмбрионов данио-рерио на 6-луночную пластину с использованием агарозы с низким содержанием плавления. Он также обеспечивает процесс получения изображений живых эмбрионов и их анализа с помощью программного обеспечения.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Настройка, получение, обработка и анализ изображений микроскопа

Приготовьте 0,8% агарозу с низкой температурой плавления (LMP): Добавьте 0,8 г LMP агарозы в 100 мл E3 и нагрейте до полного растворения. В горячем состоянии аликвот 1 мл агарозы LMP в микропробирки объемом 1,5 мл в нагревательном блоке при температуре 37 °C. Агароза LMP останется расплавленной при 37 °C. Добавьте 40 мкл 4 мг/мл (25x) с pH 7,0 трикаина на каждый 1 мл аликвоты LMP агарозы при 37 °C. ПРИМЕЧАНИЕ: При работе с пигментированным штаммом добавьте 20 мкл 0,15% (50x) PTU на каждый 1 мл аликвоты.
1. Храните оставшуюся агарозу LMP в течение н....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article

Name

Company

Catalog Number

Comments

LMP agarose (Ультрачистый LMP агарозный)

Инвитроген

16520100

Трикаин (порошок) (трикаин метансульфонато, трикаин-S)

Вестерн Кемикал Инк

МС 222

6-луночные планшеты со стеклянным дном, используемые для визуализации

МатТек

П06Г1.5-20-Ф

Дозатор 10 мл (зеленый) (Pipette Pump Pipettor)

Новатэк Интернэшнл

Ф37898-0000

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission