Двухфотонная лазерная аксотомия: метод повреждения аксонов у эмбрионов рыбок данио и наблюдения за восстановлением аксонов

Аннотация

Источник: O'Brien G. S., et al. Двухфотонная аксотомия и покадровая конфокальная визуализация у живых эмбрионов данио-рерио. J. Vis. Exp. (2009).

Это видео описывает метод повреждения аксонов у эмбрионов рыбок данио-рерио с использованием двухфотонной лазерной аксотомии и наблюдением за восстановлением аксонов после травмы.

Протокол

1: Двухфотонная аксотомия с использованием специально изготовленного двухфотонного микроскопа с лазером Chameleon Ti-Sapphire

1. Подготовьтесь к визуализации. Поместите установленный эмбрион (эмбрионы) на предметное стекло под микроскопом. Сосредоточьтесь на одном эмбрионе с 40-кратным (0,8 NA) объективом для воды. Включите лазер. Нам удалось воспроизвести визуализацию и повреждение нейронов, экспрессирующих GFP, с помощью следующих параметров. Чтобы визуализировать аксоны при неповреждающей мощности, установите лазер на длину волны 910 нанометров (нм) и мощность 30 милливатт (мВт указаны как мощность образца). Откройте программное обеспечение для обработки и....