Электрофизиология взрослых рыбок данио-рерио: метод измерения внеклеточной электрической активности нейронов in vivo

Аннотация

Источник: Джонстон, Л., и др. Электрофизиологическая запись в мозге неповрежденной взрослой рыбки данио. J. Vis. Exp. (2013)

Протокол описывает процедуру проведения электрофизиологии у взрослых рыбок данио. Этот метод можно использовать для измерения нейронной активности in vivo.

Протокол

1. Электрофизиология

1. Закройте стопорный кран интубации и быстро отсоедините замок Люэра, соединяющий основание интубации с капельницей трикаина.
   1. Переместите интактную установку для интубации в электрофизиологический микроскоп и подключите к системе перфузии.
   2. Включите воду в среду обитания и перфузируйте со скоростью 1 мл/мин в течение ~1 часа, чтобы вымыть трикаин.
2. С помощью микроманипулятора под визуальным контролем расположите вторичный электрод так, чтобы кончик электрода можно было ввести в ноздрю животного или в углубление за верхней челюстью.
3. Введите иглу первичного электрода в отверстие для трепанации черепа. Введите иглу в ткань таким образом, чтобы кончик был расположен довольно поверхностно в пределах тектума зрительного нерва.
   1. Если электрод находится слишком глубоко, электрический сигнал может быть слабым.
4. Сбор и анализ электрической разницы, зарегистрированной между первичным и вторичным электродами сравнения. Этот процесс позволит получить внеклеточные записи.
   1. Соберите данные в режиме Gap-free с частотой дискретизации 5 кГц, с фильтром нижних частот 0,1 кГц и фильтром высоких частот 1 Гц.
   2. Не начинайте регистрацию электрофизиологической активности до тех пор, пока вода в среде обитания не пропитается в течение как минимум 45 минут.
   3. Запишите исходный уровень нативной активности в течение не менее 15 минут до добавления экспериментальных препаратов. Начните перфузию с экспериментальных препаратов по выбору и запишите на желаемое количество времени. В здоровых препаратах можно регистрировать неврологическую активность в течение 2-3 часов.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Среда обитания вод			pH 7,0-7,4, проводимость 400-450 μS; поддерживается Instant Ocean и Бикарбонат натрия
0,4% трис-буферизованный трикаин	Сигма-Олдрич	Е10521	pH 7,2-7,4; хранится при -20 oC
60 мл тюбики для шприцев с замком Люэра	Бектон, Дикинсон и компания	309653
3-ходовые запорные краны с соединениями Люэра
0.010 в серебряной проволоке	А-М Системс, Инк.
Держатель электродов серии Q
Чашка Петри Fisherbrand 100 мм x 15 мм	Научный центр Фишера	NC9299146
34 г Скошенная игла	Уорлд Прецизионные Инструменты, Инк.	НФ34БВ
37 см x 42 см Kimwip	Компания Kimberly-Clark Professional	TW31KEM
Труба диаметром 1/8 дюйма
Трубка диаметром 1 мм
Микроскоп (Leica MZ APO)	Можно использовать еще один микроскоп