В естественных условиях Электропорация: сайт-специфичный метод для трансфекции рыбок данио

Аннотация

Источник: Durovic, T., et al. Метод электропорации для доставки плазмидной ДНК in vivo в головной мозг взрослой рыбки данио. J. Vis. Exp. (2019).

Это видео описывает электропорацию in vivo, которая представляет собой метод доставки ДНК в эпендимоглиальные клетки у взрослых рыбок данио.

Протокол

1. Электропорация

1. Выньте рыбу из инъекционной установки, продолжая держать ее в губке.
2. Погрузите внутреннюю сторону наконечника электродов в гель для ультразвука.
3. Накройте конечный мозг рыбы небольшим количеством геля для ультразвука.
4. Расположите голову рыбы между электродами, поместив положительный электрод на брюшной стороне головы рыбы, а отрицательный — на тыльной стороне (рисунок 1C), при этом все еще удерживая тело рыбы в губке. При этом задается направление протекания тока, необходимого для электропорации эпендимоглии, расположенной в субвентрикулярной зоне.
5. Осторожно и точно прижмите электрод....

Результаты

Рисунок 1: Схематическое изображение коронального разреза конечного мозга вывернутой данио-рерио. (A) Схема коронального разреза конечного мозга данио-рерио, подчеркивающая положение эпендимоглиальных клеток, которые выстилают поверхность желудочков и строят вентральную стенку желудочка. Дорсальный эпендимальный слой соединяет два полушария и покрывает желудочек (V), расположенный между двумя клеточными .......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Гель для ультразвука	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	Гель для электродов
Электроды BTX Tweezertrodes	Платиновый Tweezertrode, Гарвардский аппарат BTX	45-0486	Диаметр 1 мм
Устройство для электропорации	BTX ECM830 Система электропорации прямоугольной фазы, аппарат BTX Harvard	45-0662

лет