Внутрибрюшинная инъекция: метод доставки раствора в брюшную полость взрослой рыбки данио

Abstract

Источник: Luukinen, H., et al. Моделирование туберкулеза у взрослых рыбок данио, инфицированных Mycobacterium marinum. J. Vis. Exp. (2018).

Это видео описывает технику внутрибрюшинной инъекции, метод доставки растворов в брюшную полость взрослых рыбок данио

.

Protocol

1. Экспериментальное заражение M. marinum при внутрибрюшинном введении

1. Нанесите пипеткой каплю 5 мкл разбавленного бактериального раствора на кусок парапленочной пленки и втяните каплю в иглу инсулина 30 г.
2. Для эксперимента используйте рыб дикого типа в возрасте 5–8 месяцев и мутантных рыб rag1−/−hu1999. Обезболите взрослых рыбок данио в воде аквариума 0,02% этиловым эфиром 3-аминобензойной кислоты (pH 7,0). Расположите рыбу брюшной стороной вверх в щель на влажном вспененном пластике.
   Примечание: Рыбы-мутанты не способны подвергаться соматической рекомбинации и вырабатывать функциональные Т- и В-клетки.
3. Введите иглу между брюшными плавниками под углом примерно 45°. Держите отверстие иглы вверх, чтобы следить за тем, чтобы все отверстие находилось внутри брюшной полости. Медленно введите бактериальную суспензию и осторожно удалите иглу.
   заметка: В случае, если красный индикатор вытекает из рыбы при инъекции, исключите рыбу из эксперимента.
4. Сразу после инъекции пересадите рыб в восстановительный резервуар с пресной водой из аквариума.
5. Каждые 15 минут отбирайте образцы бактериальной суспензии на планшетах 7H10 из используемой бактериальной аликвоты и инкубируйте бактерии при температуре 29 °C в течение 5 дней, а затем проверяйте дозу инфекции, подсчитывая колонии на планшетах.
6. Регулярно проверяйте самочувствие рыб и усыпляйте всех рыб с симптомами инфекции с концентрацией этилового эфира 3-аминобензойной кислоты более 0,02% (pH 7,0).
   заметка: Примерно у 7% взрослых рыбок данио, инфицированных 34 ± 15 КОЕ, и у 30% рыбок данио, инфицированных 2029 ± 709 КОЕ, появятся симптомы к 8 неделям. Симптомы могут включать ненормальное плавание, отсутствие реакции на прикосновения, задыхание, отек или наблюдаемое истощение.
7. Ухаживайте за рыбками данио в соответствии с общепринятыми стандартами.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mycobacterium marinum	Коллекция американской типовой культуры	ATCC 927
Феноловый красный	Сигма-Олдрич	П3532
Фосфатно-солевые буферные таблетки (PBS)	Сигма-Олдрич	П4417-50ТАБ
Миддлброк 7H10 агар	BD, Thermo Fisher Scientific	11799042
этиловый эфир 3-аминобензойной кислоты (pH 7,0)	Сигма-Олдрич	А5040
Omnican 100 30 G игла для инсулина	Браун	9151133
1 мл шприца	Хенке Сасс Вольф	4010.200В0