Методическая статья

Вскрытие сердца: метод наблюдения за развитием сердца у рыбок данио

30 апреля 2023 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Singleman C. et al., Вскрытие сердца у личинок, молодых и взрослых рыбок данио, Danio rerio. J. Vis. Exp. (2011).

Это видео описывает технику выделения сердца у рыбки данио на нескольких стадиях развития для изучения развития, созревания и старения сердца.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Измерение рыбы и вскрытие

  1. Положите одну рыбу в чашку Петри, наполовину наполненную свежей PBS, и положите ее на правый бок.
  2. Измерьте длину рыбы от рыла до основания хвоста (хвостовой стебель), не включая хвостовые плавники, с помощью цифрового штангенциркуля мм (рис. 1). Это стандартная длина (SL).
  3. Каждой рыбе может быть присвоена комбинация цифр/букв, чтобы можно было отследить отдельную рыбу и полученное в результате расчлененное сердце для последующего анализа. Данные, включая численность родительского поголовья, возраст на момент фиксации, измерения SL, были занесены в электронную таблицу и организованы на основе этих меток.
  4. Перед вскрытием пробирки для ПЦР маркируют присвоенным номером отслеживания и заполняют PBT или другим раствором, подходящим для дальнейшего анализа.
  5. Ориентируйте рыбу брюшной стороной вверх в чашке Петри, одновременно стабилизируя тело щипцами, удерживающими голову между глазами и жабрами (Рисунок 1).

Мелкая рыба (меньше 12 мм SL):

  1. a) Используя острые щипцы или микроиглу в держателе для булавок, удалите грудные мышцы и плавники из тела, чтобы открыть сердце. Постоянное движение щипцов во время вскрытия может вызвать течения в PBT, которые приводят рыбу в движение. Это особенно проблематично для более мелких рыб, поэтому можно использовать микроиглу для удаления грудных мышц и плавников и открытия полости тела.
  2. а) Аккуратно с помощью щипцов вытащите сердце из полости из-под предсердия. В качестве альтернативы, у некоторых рыб вы можете удалить сердце, осторожно вытащив луковицу, а остальная часть сердца последует за ней. Будьте осторожны с расположением предсердия при использовании этого метода, так как его можно легко повредить. Если с сердцем поступает лишняя ткань, это нормально и может быть выведена впоследствии.
  3. а) Если рыба содержит флуоресцентный сердечный маркер, такой как Tg(myl7:GFP)twu34, используйте флуоресцентный эндоскоп для вскрытия и проверьте удаление сердца путем цветения (Рисунок 2).
  4. а) После того, как сердце будет извлечено из полости, используйте щипцы для удержания сердца и микроиглу для удаления лишней несердечной ткани и эпикардиальной оболочки с внешней стороны сердца.

Крупная рыба (более 12 мм SL):

  1. b) Используя микроножницы с пружинной ручкой, сделайте три разреза глубиной менее 1 мм: 1- поперечный разрез через жабры 2- поперечный разрез на передней части живота 3- сагиттальный разрез на вентральной стороне, соединяющий оба разреза (Рисунок 3).
  2. б) С помощью острых щипцов удалить грудные мышцы и плавники из тела, чтобы открыть полость тела и обнажить серебристую ткань перикарда (рисунок 4А). Удалите эту ткань перикарда, и сердце станет видимым (рисунок 4B).
  3. б) С помощью микроножниц перережьте артерию, соединенную с луковицей артериоза, расположенную выше сердца. Как только эта артерия будет перерезана, поместите кончики щипцов под предсердие, используйте щипцы, чтобы вычерпать сердце из полости. Если с сердцем поступает лишняя ткань, это нормально и может быть удалено позже.
  4. б) После того, как сердце будет извлечено из полости, используйте два щипца, чтобы удерживать сердце и удалить лишнюю ткань, или одну пару щипцов для удержания сердца и микроиглу для удаления лишней, несердечной ткани. Эпикардиальная оболочка, о которой свидетельствует ее черная пигментация, при желании может быть удалена с внешней стороны сердца, если аккуратно соскоблить ткань.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Рисунок 1.Зажмите рыбу щипцами между глазами и жабрами.

figure-results-2
Рисунок 2.Специфичный для сердца флуоресцентный трансгенный маркер, такой как Tg(myl7:GFP)twu34, показанный здесь, может помочь в визуализации сердец, расчлененных у более мелких рыб.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Щипцы #55 Инструменты для точной науки11295-51
Микроножницы Инструменты для точной науки15005-08
Держатель штифтаИнструменты для точной науки26016-12
МикроиглыИнструменты для точной науки10130-10
Чашки Петри BD Biosciences351029
гг.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи