Модель кардиомиопатии рыбок данио: лекарственно-индуцированная кардиотоксичность

Аннотация

Источник: Ma X., et. al. Модель кардиомиопатии, вызванной доксорубицином, у взрослых рыбок данио. J. Vis. Exp. (2018).

В этом видео описывается техника создания модели кардиомиопатии данио-рериопатии с минимальными вариациями среди экспериментальных групп, и в образце мы создаем модель кардиомиопатии данио-рериопатии с использованием препарата доксорубицин.

Протокол

1. Инъекция DOX взрослым рыбам

1. Поместите чистую чашку Петри диаметром 100 мм с губкой внутрь под микроскоп для вскрытия, затем отрегулируйте фокусировку. Разрежьте губкой полость длиной около 4 см для удержания рыбы. Сделайте более длинную полость для более крупной рыбы.
2. Приготовьте иглу 34 г с микрошприцем объемом 10 мкл. Промойте иглу 1x HBSS буфером, чтобы удалить любые пузырьки и блоки из шприца и трубки.
3. Обезболить взрослых рыб в зародышевой воде, содержащей 0,16 мг/мл трикаина, в течение 2 мин.<бр/> ПРИМЕЧАНИЕ: Длительная анестезия в течение 5 минут с последующей инъекцией DOX может легко привести к гибели рыбы.
4. Замочите губку в зародышевой воде с трикаином, и переложите рыбу на губку для инъекций.
5. Выполните внедрение IP DOX одним из двух методов, описанных ниже.
   1. Классическая инъекция IP
      1. Расположите рыбу брюшком вверх в полости губки. Быстро введите иглу под углом 45° к телу рыбы в среднюю линию между брюшными плавниками и проникните примерно на 1-2 мм. Медленно выпускайте все решения DOX. Подождите 5 с, прежде чем вытаскивать иглу. Проверьте доставку DOX по видимому красному цвету в брюхе рыбы.
   2. Внедрение альтернативной интеллектуальной собственности
      1. Положите рыбу на губку боковой стороной передней стороной вправо. Аккуратно стабилизируйте рыбу с помощью тупых концевых щипцов левой рукой, а правой держите микрошприц.
      2. Расположите иглу ниже боковой линии над брюшным плавником скосом вверх. Указав в положении «7 часов» под углом 45°, введите иглу на 3-4 мм в полость рыбы, расположенную между брюшным и анальным плавниками, а затем медленно нажмите на поршень. Проверьте доставку DOX по видимому красному цвету в брюхе рыбы.
6. Быстро перенесите введенную рыбу в чистый резервуар для пересечения, наполненный пресной водой, чтобы рыба могла восстановиться. Промойте иглу один раз 1x HBSS буфером между инъекциями.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Цистерна для переправы	Акванерия	ZHCT100	Рыбоводство
Доксорубицина гидрохлорид	сигма	Д1515-10МГ
Сбалансированный солевой раствор Хэнка (HBBS)	ТермоФишер	14025076	Транспортное средство для DOX
Чашка Петри 100 мм	сокол	431741
10 μл микрошприц NanoFil	ВПИ	НАНОФИЛ	Для инъекций
Игла 34 калибра	ВПИ	НФ34БВ-2	Для инъекций
Трикаин	серебристый		Обезболивание рыб