zPDX-анализ инвазивности: исследование инвазивного поведения метастатических раковых клеток в ксенотрансплантатах эмбрионов данио-рерио

Аннотация

Источник: Ren, J. et al. Инвазивное поведение клеток рака молочной железы человека у эмбрионов рыбок данио. J. Vis. Exp. (2017).

Это видео описывает метод микроинъекции для доставки клеток рака молочной железы в перивителлиновое пространство трансгенных эмбрионов рыбок данио. После инкубации мы визуализируем эмбрион под флуоресцентным микроскопом, чтобы наблюдать за инвазией, диссеминацией и метастазированием раковых клеток.

Протокол

1. Изображение и анализ метастатического процесса

1. Соберите несколько обезболенных эмбрионов с помощью пастеровской пипетки с широким наконечником и перенесите их на стеклянное дно полистирольной посуды.
2. Удалите лишнюю воду и оставьте ограниченное количество яичной воды. Манипулируйте эмбрионом с помощью инструмента для петли для волос и накройте стекло крышкой.
3. Используйте инвертированный конфокальный микроскоп в сочетании с погружными в воде или сухими объективами на большом расстоянии. Расположите эмбрион таким образом, чтобы интересующая область была как можно ближе к объекту.
4. Выполняйте визуализацию сразу ....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Пипетка Пастера с широким наконечником (0,5-20 мкл)	Эппендорф	F276456I
Конфокальный микроскоп	Лейка	SP5 ШТЭД
Стереомикроскоп	Лейка	МЗ16ФА
Tg (fli:EGFP) штамм данио-рерио			Любезно предоставлено доктором Евой Снаар Ягальской (Институт биологии, Лейденский университет, Лейден, Нидерланды)
Посуда из полистирола со стеклянным дном	WillCo	ГВСТ-5040
Флуоресцентный стереомикроскоп	Лейка	М165 ФК
Трикаин (3-аминобензойная кислота)	СигмаОлдрич	А-5040