Приживление аденокарциномы: метод имплантации раковых клеток в легкие мыши

Аннотация

Источник: Stevens, L.E. et al, Предварительное кондиционирование дыхательных путей мышей с помощью бломицина повышает эффективность приживления клеток ортотопического рака легких. J. Vis. Exp. (2018).

Это видео описывает метод приживления клеток аденокарциномы легкого в легких мышей путем предварительного кондиционирования дыхательных путей агентом, вызывающим фиброз - блеомицином. Этот метод значительно усиливает ортотопическое приживление клеток рака легких в легкие мышей

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Лечение блеомицином

1. Планируйте интрахеальное введение мышам блеомицина за 14 дней до приживления опухолевых клеток.
2. Разморозьте бульон блеомицина на льду за 2 ч до инъекции.
3. После размораживания разбавьте блеомицин до желаемой рабочей концентрации (0,02 ед/50 мкл или 0,005 ед/50 мкл) и держите его на льду.
   заметка: Концентрация блеомицина зависит от штамма мыши, используемого для экспериментов (Таблица 1). Для определения оптимальной дозы следу....

Результаты

Таблица 1: Список рекомендуемых доз блеомицина для тестируемых линий мышей.

Напряжение мыши	Клеточная линия	Количество введенных клеток	% приживления		p значение

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Стенд для интубации грызунов	Брейнтри Сайентиал	РИС-100	Рекомендуемая стойка для интратрахеального введения
Блеомицин	сигма	В5507-15ООН	ВНИМАНИЕ: Опасность для здоровья GHS08
Катетер Exel 24G	рыбак	1484121	Извлеките иглу. Для интратрахеального введения
Кетамин (Кетазет inl 100 мг/мл C3N 10 мл)	Дворецкий Шайн	No 56344	Для обезболивания мышей
Ксилазин	Дворецкий Шайн	No 33198	Для обезболивания мышей
Шприц 1мл	BD / Фишер	Тел.: 14-823-434	Для внутрибрюшинных инъекций
Ветеринарная офтальмологическая мазь Puralube	БАТЛЕР ANIMAL HEALTH COMPANY ООО	8897	Для предотвращения сухости глаз во время анестезии
МИ-150 ОСВЕТИТЕЛЬ 150 ВТ МИ-150	ДОЛАН-ДЖЕННЕР ИНДАСТРИЗ	МИ-150/EEG2823M	Для освещения и визуализации трахеи
Щипцы Graefe, 2,75 (7 см) длина с зубцами	Робоз	РС-5111	Для интратрахеального введения
Фляга T/C 75см кв.м скошенная горлышко, синяя крышка	Фишер / Корнинг	353135
Фосфатно-солевой буфер	Технологии Life	14190-144
0,25% Трипсин-ЭДТА	Технологии Life	No 25200-056
Пипетка Pipet-Lite, унв. SL-200XLS+	МЕТТЛЕР-ТОЛЕДО ИНТЕРНЭШНЛ	17014411
Автоматизированный счетчик ячеек Countess	Технологии Life	AMQAX1000
Порошок D-люциферина	Перкин Элмер Хелс Сайенс Инк	122799	Для люминесцентной визуализации. Восстановите порошок с PBS до рабочей концентрации 15 мг/мл. Защита от света
IVIS Spectrum Xenogen Bioluminiscence	Перкин Элмер Хелс Сайенс Инк	124262	Для биолюминесцентной визуализации in vivo
Мыши B6129SF1/Дж	Лаборатории Джексона	101043
Элементы NIH-H2030	АТКС	КРЛ-5914
Элементы PC9	Nguyen DX et al. Cell. 2009; 138:51–62
Программное обеспечение для работы с живыми изображениями	Перкин Элмер Хелс Сайенс Инк	128113	Для биолюминесцентного анализа in vivo

гг.