1. Подготовка образцов опухолевой ткани
- Фиксация опухолевой ткани в 10% нейтральном буферном формалине (НБФ) в кассете.
заметка: Опухолевая ткань из проксимальных опухолей легких обычно получают с помощью бронхоскопии, выполняемой под умеренной седацией пульмонологом или специалистом по легким. При периферических поражениях и диффузных заболеваниях легких показана трансбронхиальная или игольчатая биопсия. Эти процедуры обычно проводятся в операционной или отделении интенсивной терапии.
- Встроить кассету в парафин.
заметка: Фиксация может быть достигнута путем перфузии или погружения сразу после диссекции и обычно занимает 8–10 часов. Фиксирующий объем должен быть в 15–20 раз больше объема образца. Не рекомендуется фиксировать биопсию ткани более чем на 10 ч, поскольку чрезмерная фиксация может вызвать маскировку антигена. Скорость фиксации составляет около 1 мм/ч при комнатной температуре.
- Проникните в неподвижный образец ткани с помощью воска в тканевый процессор (см. Таблицу материалов).
заметка: Обезвоживание проводится в трех спиртовых ваннах с увеличением концентраций 70%, 85% и 90%. Вода окончательно удаляется тремя заключительными ваннами с абсолютным спиртом. Очищение проводится в трех ваннах с толуолом, а инфильтрация воска – в ваннах с горячим воском (44–60 °C).
- Вставьте ткань в форму, заполненную расплавленным парафином (см. Таблицу материалов) и дождитесь застывания.
- Разрез залитой парафином ткани толщиной 3 мкм на микротоме.
- Перенесите парафиновую ленту на положительно заряженное предметное стекло микроскопа (см. Таблицу материалов).
- Высушите предметное стекло в течение 1 часа при температуре 37 °C.
Примечание: Храните срезы ткани при температуре 2–8 °C (предпочтительно) или при комнатной температуре до 25 °C для сохранения антигенности и окрашивания в течение 15 дней после среза.
2. Подготовка цитологических образцов
- Соберите бронхиальные промывки в консервирующий раствор (см. Таблицу материалов).
заметка: Для этого используется стандартная бронхоскопическая методика.
- Промывайте распределение бронхов, из которых берется проба. Соберите средства для стирки в чистую емкость. Наклейте на контейнер этикетку, указав имя и фамилию пациента, дату рождения и источник образца.
- Переложите бронхиальные промывки в коническую пробирку объемом 50 мл и добавьте 2 г порошка DL-дитиотреитола (см. Таблицу материалов), переведите пробирку в течение 30 минут, а затем центрифугируйте при 250 х г в течение 5 минут при комнатной температуре.
- Удалите надосадочную жидкость и добавьте 10 мл муколитического раствора (см. Таблицу материалов).
- Встряхните образец в течение 20 минут на средней скорости (уровень 9) и центрифугируйте его при 250 x g в течение 5 минут при комнатной температуре.
- Удалите надосадочную жидкость и поместите клеточную гранулу в пробирки для сбора, содержащие 10% ТБЧ.
- Добавьте 4 капли реагента для подготовки клеточного блока (см. Таблицу материалов) в клеточную гранулу.
- Перенесите клеточную гранулу в кассету, зафиксируйте ее в 10% NBF и загрузите парафином для подготовки и разрезания клеточного блока (см. шаги 1.1–1.7).
