Инстилляция и фиксация легких: введение жидкости в трахею и фиксация легких для измерения фиксированного объема легких

Аннотация

Источник: Limjunyawong, N. et al, Методы инстилляции и фиксации, полезные в исследованиях рака легких у мышей. J. vis. Exp. (2015).

Это видео описывает простой и надежный метод введения жидкости в трахею для закапывания легких, фиксации и измерения объема легких.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Инстилляция легких

1. Выберите коммерческую канюлю для внутривенного введения длиной один дюйм и 20 г для использования для интубации.
2. Измените кончик катетера вручную, согнув его вручную, чтобы создать небольшую кривизну на кончике, как показано на рисунке 1.
3. Обезболите мышь смесью кетамина (100 мг/кг) и ксилазина (15 мг/кг) введенных внутривенно и подтвердите анестезию отсутствием рефлекторных движений. Нанесите ветеринарную мазь на глаза сразу после наркоза. Сразу после анестезии нанести на глаза ветеринарную мазь и дать карпрофен (5-10 мг/кг КВ) для послеоперационной и инстилляционной анальгезии.
4. Положите мышь на спину на наклонную платформу. Как показано на рисунке 2, большой офисный бандаж с приклеенными шовными петлями отлично работает.
5. Выбрейте брюшную часть шеи, очистите и продезинфицируйте область шеи 70% спиртом. В новых перчатках без латекса и пудры используйте хирургические инструменты, продезинфицированные 70% спиртом.
6. С помощью острых ножниц сделайте небольшой хирургический разрез на шее примерно на 12 мм ниже нижнего резца.
7. С помощью щипцов аккуратно потяните кожу в области шеи каудально до тех пор, пока не будет видна вентральная стенка трахеи.
8. Аккуратно втяните язык и введите канюлю согнутым кончиком, наклоненным к брюшной поверхности мыши. Как в пункте 1.4, аккуратно потяните за кожу в области шеи, и вставьте канюлю в трахею.
   заметка: После небольшой практики будет видно, как катетер движется вниз по трахее. Если он попадает в пищевод, то визуального наблюдения за движением катетера не будет. Разрезы в трахее не делаются.
9. Как только катетер будет виден в трахее в области шеи, продвинуте его примерно на 5 мм, чтобы надежно пройти через голосовые связки, но все еще значительно выше киля.
10. Приготовьтесь к закапыванию до 50 мкл жидкости путем введения через катетер с помощью наконечника пипетки, загружающего гелем. Поместите наконечник в втулку Люэра, но перед введением внимательно посмотрите, чтобы наблюдать за движением жидкости в наконечнике синхронно с дыханием мыши. Затем введите инстиллят.
11. С помощью шприца объемом 1 мл немедленно сделайте относительно быстрое надувание 0,6 мл воздуха в легкие через катетер, чтобы помочь распределить жидкость глубоко в легких. Снимите канюлю.
12. Снимите канюлю.
13. Используйте небольшое количество цианоакрилатного клея, чтобы закрыть небольшую операционную рану в соответствии с инструкциями на вкладыше для VetBond. Поместите мышей в индивидуальные клетки и визуально наблюдайте за ними до тех пор, пока они не проснутся и не будут вести себя нормально без каких-либо признаков дискомфорта.

2. Измерение фиксированного объема легких

1. Измерьте объем легких, используя принцип Архимеда, как показано на рисунке 3. Удалите неподвижное легкое из формальдегида и рассеките сердце и любую другую нелегочную ткань.
2. Используйте заранее сконструированное простое самодельное проволочное опорное устройство, которое используется для того, чтобы полностью удерживать легкие под водой><. заметка: Это устройство должно быть совместимо с любыми используемыми весами. Типичное устройство, показанное на рисунке 4, изготовлено из пластиковых пипеток и тонкой (20 G) проволоки. Эта система хорошо работает с весами, используемыми в видео, но может быть легко адаптирована к большинству лабораторных весов.
3. Поставьте на весы стакан с ≈200 мл воды и опустите в воду опорную клетку. Смотрите Рисунок 5. Снимите металлическую клетку; Поместите легкое на поверхность воды и прижмите под воду с помощью клетки.
4. Запишите вес на весы. Это число отражает объем вытесненной воды и, таким образом, является прямым показателем объема легких. Будьте осторожны, чтобы убедиться, что легкое, шов или любая часть проволочной клетки не касаются боковых сторон или дна стакана.
5. Для точности повторите это измерение. Извлеките легкое из воды, а просушите на салфетке. Снова поставьте стакан с клеткой на место и повторите измерение объема легких. Затем следует усреднить два измерения объема.
   заметка: Если легкие оставить в формалине более чем на неделю, воздух в легких будет растворен в жидкости. Когда это происходит, легкое опускается, поэтому больше нет необходимости использовать какое-либо устройство, как на рисунке 4, чтобы удерживать легкое в погруженном состоянии. В таком случае объем можно измерить, просто удерживая легкое за одну из нитей шовного материала до полного погружения, как показано на рисунке 3.

Результаты

Рисунок 1: Внутривенный катетер со слегка изогнутым концом, используемый для инстилляции.

Рисунок 2: Наклонное связующее вещество с 3 кольцами, используемое для поддержки мышей во время интубации. Этот бандаж устанавли...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Лабораторные весы	Охаус	Adventurer Pro Модель AV 313	Другие весы можно использовать, если они имеют диапазон от 1 до 300 г
20 г внутривенного катетера Люэра	Инсилте		Несколько других возможных поставщиков, например, Jelco Optiva
Лабораторный флакон 500 мл	различный		Несколько других возможных поставщиков