Визуализация динамики кальция в клетках поджелудочной железы: метод изучения изменений концентрации цитозольного кальция в островках поджелудочной железы в режиме реального времени

Аннотация

Источник: Hamilton, A., et al. Визуализация динамики кальция в субпопуляциях островковых клеток поджелудочной железы мышей. J. Vis. Exp. (2019).

Это видео описывает технику визуализации островковых клеток в реальном времени для изучения изменений концентрации цитозольного кальция в малых субпопуляциях островковых клеток поджелудочной железы. Субпопуляции малых клеток могут быть идентифицированы с помощью функциональных реакций на маркерные соединения, такие как адреналин и грелин, которые вызывают изменения цитозольного кальция в определенных популяциях островковых клеток. Это может дать представление о перекрестных помехах между уровнем глюкозы в крови и секреторным выходом островков.

Протокол

1. Загрузите краситель или сформулируйте датчик

1. Приготовьте улавливаемый краситель.
   1. Растворите аликвоту (обычно 50 мкг) улавливаемого красителя (например, Fluo-4) в ДМСО до исходной концентрации 2 мМ. Добавьте плуроновую кислоту до конечной концентрации 1% (используя 20% запас в ДМСО), чтобы улучшить солюбилизацию красителя.
   2. Аликвотируйте краситель в небольшие ПЦР-пробирки (по 2 мкл в каждую). Краситель можно хранить в замороженном виде (-20 °C) в течение нескольких недель.
2. В качестве альтернативы можно подготовить рекомбинантный датчик.
   1. Распределите сенсор (например, аденовирусный вектор, кодирую....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Цель 40x/1.3
GCaMP6f, в аденовирусном векторе (тип 5 человека)	Вектор Биолабс	1910 г
Фетальная бычья сыворотка	Сигма-Олдрич	Ф7524-500МЛ
RPMI средний	Thermo Fisher (GibCo, Life Technologies)	61870044
пенициллин/стрептомицин	Thermo Fisher (GibCo, Life Technologies)	15140122
Микроскоп Axiovert 200
Флуо4	Thermo Fisher (Life Technologies)	Ф14201

.