Флуоресцентная ортотопическая модель мыши: имплантация GFP-экспрессирующих раковых клеток мышам для оценки прогрессирования опухоли in vivo

Аннотация

Источник: Морено, Д. А., и др. Флуоресцентная ортотопическая мышиная модель рака поджелудочной железы. J. Vis. Exp.(2016)

Это видео демонстрирует протокол имплантации зеленых флуоресцентных клеток рака поджелудочной железы, экспрессирующих белки, ортотопически в поджелудочную железу мыши. Ортотопическая мышиная модель помогает в исследовании эффективности новых методов лечения первичных и метастатических опухолей.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом Jove.

1. Хирургическая имплантация

ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что все хирургические материалы и инструменты стерильны. Всегда практикуйте асептические методы.

1. Положите на стол грелку и накройте стерильной простыней. Установите наркозный аппарат и убедитесь, что все принадлежности находятся в пределах досягаемости руки.
2. Поместите морду животного в маску для анестезии и установите анестезию на 1 л/мин кислорода и 2,5% изофлурана.
3. Аккуратно потрите бок животного йодом, и промойте 70% этанолом. Повторите три раза.
4. Подтвердите, что животное полностью обезболило, ущипнув заднюю лапу. Животное полностью обезболено и готово к операции, если не наблюдается никакой реакции. Однако, если животное вздрагивает, убедитесь, что в вапорайзере достаточно анестезии, и дайте животному больше времени, чтобы полностью погрузиться под наркоз.
5. Загрузите примерно 200 мкл клеточной суспензии в шприц TB объемом 1,0 мл с иглой 18 G (предварительно охлажденной). Замените иглу на иглу 27 G и вернитесь ко льду до тех пор, пока она не будет готова к использованию.
6. Найдите общую область селезенки (левый верхний квадрант брюшной полости) и с помощью щипцов сожмите кожу поверх этой области. С помощью хирургических ножниц сделайте разрез примерно в 1,0 см для создания кармана. Аналогичным образом зажмите гладкую мускулатуру в верхней части селезенки и прорежьте ее насквозь, чтобы получить доступ к брюшной полости.
7. Аккуратно возьмитесь за каудальный конец селезенки и вытяните его из тела. Поджелудочная железа будет прикреплена к селезенке. Раздвиньте поджелудочную железу с помощью влажной стерильной ватной палочки и найдите хвост поджелудочной железы.
8. Введите 50 мл инъекции в хвост поджелудочной железы, оставьте иглу внутри на 10 секунд и медленно вращайте иглу из поджелудочной железы. Успешная имплантация будет выглядеть как поверхностный пузырь без каких-либо протечек.
9. Вернуть поджелудочную железу и селезенку в брюшную полость. Сначала закройте мышцу, а затем отдельно кожу. Используйте шов или скобу 6-0, чтобы закрыть разрез. Чтобы избежать боли у животного, вводите кетопрофен подкожно (5 мг/кг) в течение 24 часов. В качестве альтернативы вводите бупренорфин/к (0,05 - 0,1 мг/кг) каждые 12 часов в течение 36 часов.
10. Извлеките животное из наркоза и верните его в клетку. Также следите за болевыми ощущениями. Животным необходимо обеспечить обезболивание во время (или даже до — упреждающего) хирургического вмешательства. Животным, испытывающим боль, должно быть предоставлено дополнительное обезболивание в соответствии с протоколом IACCUC или по назначению лечащего ветеринара или назначенного лица.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Алькаре или пеносодержащий антисептический антисептик для рук	Стерис	639680 (Английский
Шприц TB 27 г 1/2	Бектон Дикинсон	305620 (Английский
Изофлуран	Блютлер Шайн	50562
Кетопрофен	Ветеринарная клиника Форт-Додж
Хирургические ножницы, 5,5 дюйма прямой майонез	Генри Шейн	22-1600
Клеточная линия PANC-1 GFP	Антираковая промышленность
Система визуализации мелких животных: iBox Scientia	UVP, LLC. Апленд, Калифорния.		Система визуализации мелких животных для наблюдения за флуоресцентной опухолью у живых животных
SutureVet PGA 6-0 PGA	Генри Шейн	Номер 39010
Клеточная линия PANC-1 GFP	Антираковая промышленность
DPBS (Фосфатно-солевой буфер Dubelcco)	Термофишер Sci	21300025

) ) гг.