Циркулирующая экстракция микроРНК: метод выделения микроРНК из образцов плазмы с помощью органической экстракции и обогащения малых РНК

Аннотация

Источник: Canale, M. et al., Обнаружение специальной панели циркулирующей микроРНК у пациентов с метастатическим колоректальным раком. J. Vis. Exp. (2019).

В этом видео описывается экстракция циркулирующей микроРНК из образцов плазмы пациентов с колоректальным раком с помощью органической экстракции с последующим обогащением стекловолоконной колонкой. МикроРНК стабильны в биологических жидкостях, таких как сыворотка и плазма, что делает их идеальными циркулирующими биомаркерами для диагностики рака, прогноза, принятия решений и мониторинга лечения. Этот метод поможет выявить новые циркулирующие биомаркеры, способные прогнозировать клинические исходы у пациентов.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните все следующие шаги в стерилизованном вытяжном шкафу в соответствии с надлежащей лабораторной практикой (GLP).

1. Сбор и хранение плазмы

1. Соберите 3 мл образца периферической крови в пробирку K3E EDTA.
2. Центрифугируйте пробирку при комнатной температуре 1 880 x g в течение 15 мин.
3. Восстановите надосадочную плазму в аликвотах по 450 μл.
4. Храните образцы при температуре -80 °C до использования.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Обработайте пробирку периферической крови в течение 2 часов после сбора. При извлечении плазмы из трубки не с....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Безрназные пробирки Safe-lock 1,5 мл	Eppendorf	0030 123.328
Rnase-free 1000 &микро; L советы	Starlab	S1122-1830
Безрназный сейф-замок 2 мл пробирки	Eppendorf	0030 123.344
Rnase-free 20 &микро; L советы	Starlab	S1123-1810
Rnase-free 200 &; L советы	Starlab	S1120-8810
mirVana PARIS РНК и набор для очистки нативного белка	Thermo Fisher	AM1556
100% этанол и класс ACS	Реагенты Carlo Erba	414605
2-меркапто-этанол	Sigma-Aldrich	M3148
0.2-2, 1-10, 2-20, 20-200, 100-1000 &m; L лабораторные пипетки Вытяжной
шкаф
Настольные микроцентрифуги
вихрь