Мышиная модель резекции подвздошной кишки: изучение метаболизма желчи, вызванного илеэктомией, на мышиной модели

Аннотация

Источник: Zhang, R., et al. Вызванное илейэктомией избыточное накопление желчи в кишечнике мыши. J. Vis. Exp. (2017)

Это видео описывает подробный протокол резекции кишечника на мышиной модели. Этот метод дает представление о мальабсорбции, избыточном накоплении и токсичности желчи, вызванной илейэктомией, в кишечнике мыши.

Протокол

1. Илеэктомия и анастомоз

1. Обезболить мышей изофлураном (2 - 3%) в инкубационной камере мелких животных. Определите адекватную анестезию с помощью техники щипкового пальца ноги, пока животное находится на изофлуране.
2. Удалите волосы на животе, нанеся средства для эпиляции, и сотрите волосы хирургическими губками, сохраняя анестезию. Поместите мышь на хирургический стол для мелких животных с регулируемой температурой (рис. 1A), чтобы поддерживать температуру тела на уровне 37 °C. Поддерживайте анестезию изофлураном (1–2%) через лицевую маску. Обработайте глаза мыши глазной мазью.
3. Очистите кожу с помощью повидон-йода и 70% спирта и накройте операционную область брюшной полости стерильной хирургической марлей (рисунок 1Б).
4. Сделайте разрез живота по средней линии с помощью хирургического скальпеля после того, как анестезия начнет действовать. Используйте аппликатор с ватным наконечником для защиты кишечника и потяните мышцы живота мыши с помощью ретракторов, чтобы полностью открыть и обнажить брюшную полость (Рисунок 1C).
5. Найдите слепую кишку. Начиная с слепой кишки, осторожно выведите соединенную подвздошную кишку и часть тощей кишки из брюшной полости (рисунок 1D).
   заметка: Слепую кишку можно легко определить благодаря ее большому размеру даже после голодания.
6. Перевязать верхнюю ветвь верхней брыжеечной артерии шелковым швом 7-0, чтобы перекрыть кровоснабжение подвздошного сегмента, который подлежит иссечению. Цвет подвздошной кишки меняется с розового на темно-фиолетовый после перевязки. (Рисунок 1E - F).
7. В зависимости от цели эксперимента, с помощью ножниц, вырезают и удаляют 50% или 90% подвздошной кишки.<бр/> заметка: При фиктивной операции не выполняйте перевязку верхней брыжеечной артерии и не удаляйте подвздошную кишку.
8. Промойте просвет обоих концов подвздошной кишки 0,9% физиологическим раствором.
   заметка: Поскольку оставшаяся неповрежденная подвздошная кишка все еще получает нормальное кровоснабжение из верхней брыжеечной артерии, небольшое количество крови будет вымыто во время процесса. Это также указывает на то, что кровоснабжение подвздошных концов в норме и обеспечивает отсутствие ишемии во время процедуры анастомоза (Рисунок 1G).
9. Расположите брыжейки на стороне обоих концов подвздошной кишки. Выровняйте брыжейки и сшите концы подвздошной кишки с помощью 8-0 шов (Рисунок 1G - H).
10. Сшите контралатеральную сторону подвздошной кишки, чтобы подвздошная кишка оставалась анастомозированной естественным образом (Рисунок 1I).
11. Сшите верхнюю и нижнюю стороны между двумя исходными швами, чтобы тщательно соединить два конца подвздошной кишки вместе (Рисунок 1J).
12. Убедитесь в отсутствии утечки из места анастомоза после завершения трехэтапной процедуры наложения швов (Рисунок 1G-I). Верните слепую кишку и тонкую кишку в брюшную полость на исходное анатомическое расположение. Промойте область операции теплым 0,9% физиологическим раствором с помощью тупой иглы. (Рисунок 1K).
13. Закройте разрез мышечного слоя живота швом 6-0. Выровняйте разрез кожи живота с помощью щипцов и зашите кожу живота, чтобы способствовать оптимальному заживлению раны (Рисунок 1L).

2. Послеоперационный уход

1. Переведите послеоперационных мышей в отделение интенсивной терапии для восстановления. Поместите их в клетку с бумажным постельным бельем на грелке с регулируемой температурой, чтобы продолжить послеоперационное восстановление в течение ночи. Снабжайте мышей мягкой пищей в дополнение к обычной пище и воде.
2. Вводите бупренорфин (0,05 - 0,1 мг/кг) с подкожным введением каждые 8-12 ч для обезболивания.
   заметка: Усыпляйте мышей с помощью CO₂, если они тяжело больны.
3. В конечной точке принесите в жертву мышей, использующих передозировку изофлурана, и при необходимости соберите образцы (раздел 3).

3. Оценка избыточного скопления желчи, вызванного илэктомией

1. Взвесьте и препарируйте мышей через день после резекции 0% (фиктивная), 50% или 90% подвздошной кишки.
2. Удалите желудочно-кишечный тракт и взвесьте его. Рассчитайте отношение массы ГИ к массе тела, чтобы оценить тяжесть мальабсорбции и избыточного накопления желчных солей.
3. Перенесите желудочно-кишечные тракты в конические пробирки объемом 15 мл и разрежьте их на короткие сегменты с помощью ножниц. После резки центрифугируйте при давлении 3 000 x g в течение 10 минут. Перенесите надосадочную жидкость (жидкость для желудочно-кишечного тракта, содержащую желчные соли) в чистую трубку.
4. Измерьте общий объем и массу жидкости в желудочно-кишечном тракте и рассчитайте отношение массы жидкости к массе желудочно-кишечного тракта для дальнейшей оценки избыточного накопления желчи в желудочно-кишечном тракте.
5. Определить общее количество желчи в надосадочной жидкости методом анализа желчных кислот.

Результаты

Рисунок 1: Хирургические процедуры илеэктомии. (А) Поддерживайте температуру тела с помощью регулируемого по температуре хирургического стола для мелких животных. (B) Накройте операционную область стерильной марлей после подготовки кожи брюшной полости. (C) Обнажите тонкую кишку через разрез на животе по средней линии. (D) Слепая кишка (выделена белой пунктирной линией) отмечена для опред...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
С57BL/6J	Лаборатория Джексона
Диссекционный микроскоп	Олимп	СЗ61	Для хирургии
Регулятор температуры животного	Physitemp Instruments, Inc	ТКАТ-2ЛВ	Для контроля температуры тела
Изофлуран анестетик вапорайзер	ВетЭкип	911104	Для анестезии
Щипцы для рассечения	Fine Science Tools, Inc.	11274-20	Для хирургии
ножницы	Файн Сайенс Инструментс, Инк	14084-08	Для хирургии
Иглодержатель	Робоз Хирургический Инструмент Ко.	Сервер RS-7882	Для хирургии
Микроножи-игольчатое лезвие	Научный центр Фишера	10318-14	Для хирургии
6-0 шовный материал из мононити	Этикон	1698Г	Для подтяжки кожи живота
7-0 шелковый шов	Этикон	766Г	Для лигирования
8-0 шовный материал из мононити	Этикон	1714Г	Для анастомоза
Хирургические губки	Корпорация Dynarex	No 3333	Для хирургии
Маленькие аппликаторы с ватными наконечниками	Научный центр Фишера	Тел.: 23-400-118	Для хирургии
Изофлуран	Пирамал Хэлскесс Лимитед	66794-013-25	Для анестезии
Бупренорфина гидрохлорид	Рекитт-Бенкизер Фармасьютикалз	12496-0757-1 (Английский	Для обезболивания
0,9% хлорида натрия для инъекций	Б. Браун Медикал Инк.	0264-7800-10 (Английский	Для промывки/впрыска
Повидон раствор для приготовления йода	Корпорация Dynarex	1413	Для подготовки кожи
Ветеринарная мазь Puralube	Ветеринарные препараты Dechra	17033-211-38	Для защиты глаз
Лосьон для удаления волос	Черч и Дуайт Ко., Инк.		Для подготовки кожи
Отделение интенсивной терапии	ТермоКер	FW-1	Для восстановления после операции
Набор для анализа общей желчной кислоты	Диагностика Genzyme	ДЗ042А-К01	Для анализа желчных кислот

) ) г.