Методическая статья
1.5K просмотров
⸱
30 апреля 2023 г.
Источник: Kochall, S., et al. Выделение циркулирующих опухолевых клеток в ортотопической мышиной модели колоректального рака. J. Vis. Exp. (2017).
Это видео описывает подробный протокол выделения циркулирующих опухолевых клеток из образца цельной крови модели мыши с усыпленной колоректальной опухолью. Эти выделенные ЦОК могут быть культивированы и использованы для предполагаемого последующего анализа.
Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
1. Выделение циркулирующих опухолевых клеток из образцов цельной крови
ПРИМЕЧАНИЕ: Получите кровь путем чрескожной пункции сердца у мышей, находящихся под наркозом, с последующей эвтаназией. В идеале 1000 μL крови набирается в шприц, предварительно заполненный 100 μL антикоагулянта (этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) или гепарин). Используйте антитело против человеческого EpCAM (молекула адгезии эпителиальных клеток) для идентификации ЦОК. Это работает о....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Градиент плотности среды – Ficoll | Стволовые клетки - Лимфопреп | 7801 | |
| Клон антител Alexa Fluor 488 против человека CD326 (EpCAM) 9C4 | Биолегенда | No 324210 (Английский | |
| Alexa Fluor 488 антимышиный клон CD326 (EpCAM) антитела G8.8 | Биолегенда | No 118210 | |
| Чашка Петри, ø 60 x 15 мм, 21 см², вентиляционное отверстие | Грайнер биоуан | 628102 | |
| Флуоресцентный микроскоп для клеточных культур | Лейка | ||
| Микроманипулятор Transferman 4r | Эппендорф | ||
| CellTram Air | Эппендорф | Аспирационный насос, подключенный к микроманипулятору | |
| Универсальный съемник микроэлектродов Dmz | Корпорация Dagan | требуется для изготовления микрокапилляров для аспирации одиночных клеток | |
| Призменные стеклянные капилляры | Корпорация Dagan | ||
| Ручка PAP | Абкам | ||
| Фосфатный буферный раствор Дульбекко | Компания «Лайф Текнолоджис ГмбХ | 14190169 | Отборочный буфер |
| Фетальная сыворотка теленка (FCS) | БИОХРОМ АГ | С 0115 | Отборочный буфер |
| Пенициллин/стрептомицин (PenStrep) | Компания «Лайф Текнолоджис ГмбХ | 15140122 | Отборочный буфер |
| Эдта | Рот | 8040.1 | Отборочный буфер |
| Иммуногистохимия | |||
| Очищенный клон антител к человеку CD326 (EpCAM) 9C4 | Биолегенда | 324201 | Иммуногистохимический анализ EpCAM |
| HRP кролик антимышиный IgG | Абкам | АБ97046 | Иммуногистохимический анализ EpCAM |
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение