Методическая статья

Лазерная микродиссекция: метод выделения инвазионных клеток колоректального рака из 3D-органотипической модели культуры

1.1K просмотров

30 апреля 2023 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Буллок М. и др., Молекулярное профилирование инвазивного микроокружения опухоли в 3-мерной модели клеток колоректального рака и фибробластов ex vivo. J. Vis. Exp. (2014).

В видео описывается лазерное препарирование 3D-органотипической модели кокультуры с точностью до микрона. В 3D-органотипических моделях стромальные составляющие, такие как фибробласты, трехмерно культивируются совместно с раковыми эпителиальными клетками. 3D-модель служит экспериментальным инструментом, который позволяет изучать инвазию и взаимодействие рака-стромы в условиях, близких к физиологическим.

Протокол

1. Органотипическая подготовка:

Приготовление органотипического геля, пропитанного фибробластами:

  1. Приготовьте суспензию клеток фибробластов, содержащую 5 x 105 клеток на органотипический продукт в DMEM с добавлением 10% FCS и 292 мкг/мл L-глютамина.
  2. Составляйте органотипические гели на льду в следующих соотношениях:
    • • 7 объемов Rat-Tail Collagen: смесь Matrigel (1:1)
    • • 1 том отфильтрованного 10x DMEM
    • • 1 том ФТС
    • • 1 объем суспензии клеток фибробластов, содержащей 5 x 105 фибробластов
      Для 9 гелей (1 мл на гель) приготовьте 10 мл ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Клеточные линии колоректального рака - пример показан SW480АТКСАТКС СКЛ-228
коллагенBD Biosciences354265
МатригельBD Biosciences354234
Нейлоновая мембранаМерк МиллипорVVLP01300
Металлическая сеткаКомпания «СеткаВСС20-А4themeshcompany.com
Платформа для лазерной микродиссекцииLeica MicrosystemsLeica AS LMD
Предметные стекла на мембранеМолекулярные устройства
Крезил ВайолетМерк Миллипор1052350025
»

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи