Моделирование ксенотрансплантата, полученного от пациента: метод создания мышиных моделей меланомы

Аннотация

Источник: Min Xiao et al. модель ксенотрансплантата, полученная от пациента с меланомой. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео клетки меланомы, полученные от человека, имплантируются подкожно в область бока мыши с ослабленным иммунитетом. Модель PDX позволяет проводить доклинические исследования клеток меланомы, которые лучше повторяют гетерогенность опухоли и агрессивность меланомы, наблюдаемые в условиях in vivo.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Обработка опухолевой ткани для имплантации мышей

1. Хирургическое иссечение или хирургическая биопсия ткани
   1. Перенесите ткань в стерильную чашку Петри и максимально отделите опухолевую ткань от окружающих нормальных тканей.
   2. Удалите некротическую ткань (обычно идентифицируемую как бледно-белесая ткань, расположенную в центре опухоли) из оставшейся опухоли, насколько это возможно.
   3. С помощью скальпеля разделите начальный фрагмент ....

Результаты

Рисунок 1: Альтернативные методы имплантации.(А) Опухоли могут быть переработаны либо в куски, либо в виде суспензии в виде суспензии в виде одноклеточной суспензии. (Б) Все три метода позволяют выращивать опухоли in vivo. На снимке изображены мыши, которым подкожно имплантировали опухоль и сделали снимки через 12 дней после имплантации. (C) Показаны.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
1 м хепес	КОРПОРАЦИЯ СИГМА-ОЛДРИЧ	Кат # H0887-100ML
100x PenStrep	Инвитроген	Кошка #15140163
1x HBSS-/- (без Ca++ или Mg++)	MED	Кошка # MT21-023-CV
2,5% трипсин	КОРПОРАЦИЯ СИГМА-ОЛДРИЧ	Кат # T4549-100ML	10 мл аликвот при –20°С
БСА	КОРПОРАЦИЯ СИГМА-ОЛДРИЧ	Кошка # A9418-500G
Хлоргексидин	Научный центр Фишера	Кат# 50-118-0313
Коллагеназа внутривенно (2 000 ед/мл)	Уортингтон	Кот #4189	макияж в HBSS-/- из порошкового запаса коллагеназы IV (Worthington #4189, ед/мг указан на флаконе и варьируется с каждой партией); заморозить 1
Дмсо	КОРПОРАЦИЯ СИГМА-ОЛДРИЧ	Кат # C6295-50ML
ДНКаза	КОРПОРАЦИЯ СИГМА-ОЛДРИЧ	Кот # D4527
EGTA (этиленгликоль бис (2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N'N'-тетрауксусная кислота)	Мерк	Кот # 324626.25
ФБС	ИНВИТРОГЕН ЛАЙФ ТЕХНОЛОГИИ	Кот # 16000-044
Фунгизон	ИНВИТРОГЕН ЛАЙФ ТЕХНОЛОГИИ	Кот # 15290-018
Гентамицин	НАУЧНЫЙ ФИШЕР	Кот #BW17518Z
Изофлуран	ГЕНРИ ШЕЙН ЗДОРОВЬЕ ЖИВОТНЫХ	Кошка #050031
Медиа L15 от Leibovitz	Инвитроген	Кошка #21083027
Матригель	Корнинг	Кот # 354230	Искусственный внеклеточный матрикс
Мелоксикам	ГЕНРИ ШЕЙН ЗДОРОВЬЕ ЖИВОТНЫХПреквизиция # ::Генри Шейн	Кошка #025115	1-5 мг/кг, как обезболивающее
Мыши с нулевыми NOD/SCID/IL2-рецепторами (NSG)	Институт Вистар, животноводческий комплекс		разведение
ПВА (поливиниловый спирт)	КОРПОРАЦИЯ СИГМА-ОЛДРИЧ	Кошка # P8136-250G
RPMI 1640 Medium (Mod.) 1X с L-глютамином	Научный центр Фишера	Кат# MT10041CM
скальпель	перо	Кот # 2976-22
Зажимы для ран	МикРон	Кот #427631