Визуализация экспрессии белка на основе CUBIC: процедура визуализации экспрессии белка при биопсии кожи мыши полной толщины

Abstract

Источник: Liang, H. et al. протокол CUBIC визуализирует экспрессию белка с разрешением одной клетки в препаратах Whole Mount Skin. J. Vis. Exp (2016)

Это видео описывает технику визуализации на основе CUBIC, технику визуализации, зависящую от очистки тканей, для визуальной оценки экспрессии белка в биопсии всей кожи с разрешением одной клетки в 3D. Этот технически простой протокол позволяет визуализировать белки кожи без подготовки участков кожи.

Protocol

Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Подготовка прозрачной ткани кожи мыши

ПРИМЕЧАНИЕ: Все мыши, использованные в этом исследовании, имели генетический фон C57BL/6

1. Сбор тканей кожи мыши.
   1. Гуманно усыплять мышей путем вывиха шейки матки.
   2. Осторожно удалите волоски с соответствующего участка кожи с помощью триммера, стараясь не ранить кожу.
   3. Промойте кожу для обеззараживания 70% этанолом в фосфатно-солевом буфере (PBS).
   4. Подтяните кожу тыльн....

Results

Рисунок 1: Подготовка камеры визуализации. О: Расходные материалы, необходимые для подготовки камеры визуализации, - это синяя прихватка, пластилин или что-то подобное, а также 2 покровных стекла (24 x 50 мм). Б: Подготовьте две тонкие полоски синей прихватки (диаметр примерно 2 мм х 2 см) и два покровных листа. В: Наклейте синие полоски на один покровный лист, остав.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Параформальдегид	Сигма-Олдрич	П6418
Этанол 96% (неденатуированный)	Химическое снабжение	ООН1170
4',6-диамидино-2-фенилиндол<бр /> (ДАПИ)	Рош	10236276001
N,N,N',N'-тетракис (2-гидроксипропил) этилендиамин	Мерк Миллипор	No 821940
Моно--изооктилфениловый эфир полиэтиленгликоля	Мерк Миллипор	648462
Тритон Х-100	Мерк Миллипор	648462
сахароза	Сигма-Олдрич	С0389
Оптимальная температура резки (ОКТ) Соединение	Ткань-Тек	4583
антитела к кератину14	Кованс	ПРБ-155П
антитела к Ki67	Абкам	АБ16667
Ослик против кролика Alexa 594	Технологии Life	А21207
Диметилсульфоксид	Сигма-Олдрич	Д2650
мочевина	Мерк Миллипор	Номер 66612
2,2',2''-нитрилотриэтанол	Мерк Миллипор	137002
Конфокальный микроскоп	Компания Nikon Instruments Inc	Nikon A1 - Конфокальный микроскоп
Триммер для лица cruZer6	Браун	Лицо Braun cruZer6
Азид натрия	Сигма-Олдрич	438456