Анализ минимальной эритематозной дозы: метод измерения чувствительности к ультрафиолетовому излучению на мышиных моделях

Аннотация

Источник: Амаро-Ортис, А. и др. Фармакологическая индукция эпидермального меланина и защита от солнечных ожогов на гуманизированной мышиной модели. J. Vis. Exp. (2013)

В этом видео описывается метод измерения чувствительности к ультрафиолетовому излучению в гуманизированной модели мыши — модели мыши, которая имитирует человеческую кожу. Мы определяем минимальную эритематозную дозу (MED) ультрафиолетового излучения, которая может вызвать эритему или отек на коже. Метод может помочь выяснить эффективность препаратов, используемых для снижения чувствительности к ультрафиолетовому излучению.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

Определение чувствительности к ультрафиолетовому излучению путем расчета "минимальной эритематозной дозы" (MED)

1. Используйте животных, которые были предварительно обработаны транспортным средством или форсколином. Обезболивают животных внутрибрюшинным введением стандартной смеси кетамина и ксилазина.
2. Подготовьте кусок УФ-окклюзионной ленты для тестирования MED. Чтобы проделать отверстия в ленте, используйте прочный дырокол с круглым вырезом 1 см² (Рисунки 1A и B). Наличие отверстий определенного размера и симметричного расположения в ленте облегчает распознавание изменений кожи после облучения. На каждое отверстие в ленте наклейте небольшой, но легко отделяемый кусочек ленты, который можно снимать в определенное время во время воздействия ультрафиолета, чтобы обеспечить введение различных доз ультрафиолета.
3. После того, как животные будут должным образом успокоены, поместите ленту на спинную поверхность. Глазная смазка всегда должна использоваться под анестезией.
4. Включите источник ультрафиолетового излучения, состоящий из двух ламп Westinghouse F15T8UV-B с пиковой мощностью 313 нм и диапазоном 280-370 нм. Дайте лампе уравновеситься до постоянного УФ-излучения, измеренного УФ-фотометром с датчиком UVB (обычно требуется несколько минут для нагрева ламп).
5. Основываясь на скорости пропускания УФ-излучения, измеренной УФ-фотометром, рассчитайте время воздействия УФ-излучения для каждой желаемой дозы. Например, выходная мощность UVB нашей лампы составляет 2,4 мВт/^см2. Таким образом, для введения 5 кДж/м² кожа должна быть подвергнута воздействию UVB-излучения в течение 208 секунд (что составляет 3 минуты и 28 секунд), как рассчитано ниже:
   
6. Поместите усыпленных животных (каждое с окклюзионной лентой) брюшной поверхностью вниз, чтобы обеспечить равномерное воздействие ультрафиолета. Для введения выбранных доз ультрафиолетового излучения последовательно удаляйте небольшие окклюзионные ленты, закрывающие отверстия, чтобы подвергнуть 1 см² участка кожи воздействию правильных доз облучения. Таким образом, используя приведенный выше пример, если 40 кДж/^м2 является самой большой дозой в эксперименте, то животное будет находиться под лампой в общей сложности 27 мин и 47 сек, а кожа в состоянии 40 кДж/^м2 не будет иметь перекрывающей ленты все это время. Тем не менее, лента, находящаяся при условии 5 кДж/^м2, будет удалена, когда до окончания экспозиции останется 208 секунд. Время снятия ленты должно быть таким, чтобы каждое условие заканчивалось одновременно.
7. После воздействия ультрафиолета осторожно снимите ленту с тыльной стороны кожи, стараясь не разорвать кожу резкими или чрезмерно сильными движениями. Поместите животных в теплое тихое место, чтобы они могли восстановиться после анестезии.
8. Наблюдайте за мышами в течение 24-48 часов для поиска незаметных участков эритемы (покраснения) или отека (отека), соответствующих анатомическим участкам, подвергшимся воздействию определенной дозы ультрафиолетового облучения. Фотографируйте находки кожи.
9. Значение MED соответствует минимальной дозе ультрафиолета, вызывающей воспаление, определяемое эритемой и/или отеком всего обнаженного круга кожи. Обратите внимание, что пигментация кожи может затруднить определение MED, однако эритема и отек все еще могут быть точно оценены, отчасти благодаря определенной форме отверстий в ленте во время воздействия ультрафиолета.

Результаты

Рисунок 1. Меланизация, индуцированная форсколином, защищает от УФ-опосредованного воспаления, что определено по результатам тестирования минимальной эритематозной дозы (MED). (А,Б) Положение УФ-окклюзионного тейпа и дозы UVB у животных, получающих лечение два раза в день в течение 5 дней (A,C) или один раз в день в течение 15 дней (B,D,E) либо носителем, либо форско...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Ксилазин	Анасированная инъекция	LA04612	Шенандоа, штат Айова, США
Кетамин гидрохлорид, USP	Путни	НДЦ 26637-411-01	Сент-Джозеф, Миссури, США
этанол	Лаборатории Декона.	2705
Крем для депиляции, Наир	Церковь Дуайта	JF-11 4381322	Прайстон, Нью-Джерси
Бактерицидная ртутная лампа UV-B	Вестингауз	F15T8UV-В
Радиометр фотометр	Международный свет	1ЛТ400А	Пибоди, Массачусетс, США
Изотезия, Изофлуран, USP	Дворецкий Шайн	НСД 11695-6776-1	Дублин, штат Огайо, США
Хромометр	Konica Minolta	КР-400	Рамси, штат Нью-Джерси, США
Процессор данных для хромаметра CR-400	Konica Minolta	ДР-400	Рамси, штат Нью-Джерси, США