Стереотаксический подход Cisterna Magna для терапевтической доставки на мышиной модели

Аннотация

Источник: Joshi, K., et al. Стереотаксический хирургический подход для микроинъекции каудального ствола мозга и верхнего шейного отдела спинного мозга через Cisterna Magna у мышей. J. Vis. Exp. (2022)

В этом видео демонстрируется стереотаксический подход cisterna magna для адресной доставки в ствол головного мозга и верхние отделы спинного мозга. Благодаря доступу к наполненной спинномозговой жидкостью цистерне Cisterna Magna этот подход позволяет проводить точные инъекции в труднодоступные участки с использованием стандартных стереотаксических методов.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Открытие цистернальной мембраны

1. Используйте угловые щипцы Дюмона, чтобы захватить твердую мозговую оболочку, которая простирается от затылочной кости до атланта. Возьмитесь за твердую мозговую оболочку рядом с затылочной костью и с помощью пружинных ножниц сделайте небольшое отверстие (от ~0,5 до 1,5 мм) в твердой мозговой оболочке.
   ПРИМЕЧАНИЕ: В этом ростральном месте пространство между стволом мозга и вышележащей твердой мозговой оболочкой наиболее широкое, что обеспечивает достаточно места для безопасных манипуляций с твердой мозговой оболочкой.
2. Используйте пружинные ножницы, чтобы поднять твердую мозговую оболочку и открыть ее дальше. Размер окна зависит от цели.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Большее окно потребуется при выполнении нескольких продольных инъекций или двусторонних инъекций; Небольшого окна будет достаточно при выполнении одиночных односторонних или срединных инъекций.
3. Как только твердая мозговая оболочка будет открыта, слейте излишки спинномозговой жидкости с помощью стерильного наконечника.

2. Идентификация ориентиров и нулевой точки

1. Вид дорсальной поверхности ствола мозга с детализированными ориентирами через открытую твердую мозговую оболочку. Обекс, точка, где центральный канал открывается в IV желудочек, является стандартной передне-задней и медиолатеральной нулевой точкой.

3. Инъекция мишени

1. : Опустите пипетку или шприц к мишени с помощью стереотаксического манипулятора и введите раствор, как при стандартных стереотаксических подходах. Оставьте на месте на 1-5 минут после инъекции, чтобы избежать следа иглы при использовании объемов от 3 до 50 нл. Затем поднимите пипетку или шприц с помощью стереотаксического рычага.
2. Повторите шаг 3.1. для нескольких целей.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Угловые щипцы, Dumont 5/45	FST	11251-35	Только для захвата твердой мозговой
оболочки Пружинные ножницы, Vannas 2.5 мм с прилагаемой коробкой	FST	15002-08	Ножницы только для раскрытия твердой мозговой оболочки, коробка для поднятия тела
Стереотаксический микроманипулятор	Kopf	1760-61	Крепится к держателю электродов для регулировки положения на основе координат
Стереотаксическая U-образная рама в сборе и внутриклеточная опорная пластина	Kopf	1730-B, 1711	Рама для хирургии
Аппликаторы из стерильного хлопчатобумажного наконечника	Puritan	25-806 10WC	Абсорбция крови из операционного поля