Стереотаксическое введение вирусов для стабильной генетической модификации в мышиной модели

Аннотация

Источник: Porlan, E., et al. Стабильная и эффективная генетическая модификация клеток взрослой мыши V-SVZ для анализа автономных и неавтономных эффектов нейронных стволовых клеток. J. Vis. Exp. (2016)

В этом видео демонстрируется стабильная генетическая модификация нейральных стволовых клеток (НСК) в желудочково-субвентрикулярной зоне (V-SVZ) путем стереотаксической инъекции вирусонесущего терапевтического гена в мышиной модели. Вирус проникает в НСК, подвергается обратной транскрипции, интегрируется в геном и обеспечивает стабильную и эффективную генетическую модификацию для нейротерапевтических применений.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Стереотаксическая инъекция латерального желудочка (ЛЖ) в желудочково-субвентрикулярную зону (V-SVZ)/границу стриатума или в

1. микроинъекцию ЛЖ LV
   1. Выберите и стерилизуйте инструменты, необходимые для операции (скальпель, дрель и маленький пинцет).
   2. Обезболите 6-8-недельную мышь путем внутрибрюшинной инъекции (ip) смеси кетамина и медетомидина под наблюдением ветеринара. Взвесьте каждое животное и дозаведите 50-75 мг кетамина и 0,5-1 мг медетоми....

Результаты

Рисунок 1: Схематическое изображение различных частей процедуры. (a) Получение ЛЖ для исследований по мечению in vivo, начиная с трансфекции эмбриональных клеток почки 293T (HEK293T) человека соответствующими плазмидами для получения ЛЖ и заканчивая опред.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Оборудование:
Нониир стереотаксический прибор	NeuroLab, Leica	39463001
держатель шприца	KD Scientific	KDS-311-CE
33-gauge шприц	Hamilton	P/N 84851/00	85RN
Электрическая дрель	Fine Science Tool	98096
Термоодеяло	Ufesa	AL5512/01	230-240 В, 100-110 Вт, тип C-AL01
Бритва	Jata	MP373N	Модель: красота, 3 В, 300 мА, тип HT-03.
Реагенты:
Медетомидин	Esteve	Domtor	Comercial раствор в дозе 1 мг/мл.
Кетамин	Merial	Imalgene 500	Комерциальный раствор в дозе 50 мг/мл
		медетомидина/кетамина	Приготовьте рабочую смесь медетомидина в конечной концентрации 0,2 мг/мл в разведении и кетамина в конечной концентрации 15 мг/мл в физиологическом растворе. Использовать в качестве анестезии при введении объема для получения конечной концентрации 0,5-1 мг медетомидина на кг массы тела и 50-75 мг кетамина на кг массы тела
Буторфанола	Pfizer	Torbugesic	Stock раствор в дозе 10 мг/мл. Используется в качестве обезболивания в дозе 1 мг/мл в физиологическом растворе.
0,9% физиологический раствор	Braun	13465412
Маркер хирургический	Staedler	313-9	Постоянная люмоколор
Офтальмологическая смазка		Siccafluid	0,5 г/дозис, карбомер 974P
Повидон-йод	Бетадин	694109,6	10% повидон-йод

Смесь