Офтальмологическая доставка лекарств для неинвазивной нейромодуляции в мышиной модели

Аннотация

Источник: Zhan, J., et al. Неинвазивные стратегии хронического манипулирования DREADD-контролируемой нейронной активностью. J. Vis. Exp. (2019)

В этом видео демонстрируется неинвазивный метод доставки офтальмологических лекарств для целевой нейромодуляции. Препарат доставляется с помощью глазных капель, всасывается в кровоток, проникает через гематоэнцефалический барьер и активирует определенные нейрональные рецепторы.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Повторное введение клозапина-N-оксида (CNO) с использованием глазных капель

1. Приучите животных к работе путем обтирания каждой мыши по 3 минуты в день в течение 3-4 дней перед введением глазных капель.
2. Клозапин-N-оксид (CNO, 5 мг) растворить в 1 мл стерильного 0,9% физиологического раствора (исходный раствор: 5 мг CNO/мл). Храните раствор в холодильнике при температуре 4°C.
3. Взвесьте каждую мышь перед началом эксперимента, чтобы определить количество CNO, которое необходимо ввести. Используйте 1-3 мкл капли (на каждый глаз) для достижения 1,0 мг CNO/кг массы тела.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Например, мышь массой 20 г должна получать двусторонние (по 2 мкл каждая) глазные капли.
4. Вводите глазные капли во время неактивной (световой) фазы мышей, за 2 часа до выключения света (время zeitgeber (ZT) 10). В случаях, когда необходимо ввести CNO во время активной (темной) фазы мышей, обеспечьте наличие тусклого красного света для правильного обращения с животными.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Следует принимать меры предосторожности, чтобы не нарушать циркадный (и светлый/темный) цикл экспериментальных животных.
   1. Используя микропипетку P10, загрузите необходимое количество (1-3 мкл) раствора CNO, чтобы получить 1,0 мг CNO/кг.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте новый и стерильный наконечник для пипетки для каждой глазной капли. В этой серии экспериментов были проведены двусторонние глазные капли КНО; однако, если требуется более низкая концентрация концентрации концентрации КОНУ, можно также применять односторонние глазные капли.
   2. Обездвижите мышь с помощью загривка.
   3. Медленно выдавливайте раствор до тех пор, пока на наконечнике пипетки не образуется устойчивая капля.
   4. Осторожно поднесите каплю близко к роговице глаза мыши до тех пор, пока раствор не будет подведен. Наконечник пипетки ни в коем случае не должен контактировать с глазом мыши.
   5. Отпустите мышь, поместив ее обратно в домашнюю клетку.
5. Повторяйте эту процедуру каждый день в течение 5 дней.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Эта продолжительность может быть скорректирована в соответствии с требованиями эксперимента.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
BSA	Sigma life science	#A2153-100G	Лиофилизированный порошок ≥96% (электрофорез в агарозном геле)
C57BL/6J мыши	Лаборатория Джексона	#000664	самцы мышей, 3-месячные
капилляры	Drummond Научная компания	#3-000-203-G/X	Внешний диаметр: 1,14 дюйма.
Клозапин-N-оксид	Сигма	#C0832	5 мг
форана	Бакстера	#NDC 10019-360-60	изофлуран,
USP Microinjector III	Drummond Scientific Company	#3-000-207	Nanoject III - программируемый нанолитровый инжектор
Монтажная среда	Invitrogen	#P36930	Пролонг Голд антифадерный реагент