Регенерация аксонов в седалищном нерве мыши после раздавливания

Аннотация

Источник: Li, Q., et al. Исследование регенерации аксонов млекопитающих: электропорация in vivo ганглия заднего корешка взрослой мыши. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео демонстрируется процесс регенерации аксонов в седалищном нерве мыши после раздавливания. Изолированный нерв фиксируется и подготавливается к визуализации, а флуоресцентные белки экспрессируются в нейронах для визуализации роста аксонов. С помощью эпифлуоресцентного микроскопа прослеживается регенерация аксонов от места повреждения для оценки степени повторного роста.

Протокол

1. Материалы и реагенты

1. Животные
   1. Используйте для экспериментов шестинедельных самок мышей CF1 весом 30–35 г.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Мыши содержались в группах (по 5 мышей в клетке) в индивидуально вентилируемых стерилизованных клетках с подстилкой из кукурузных початков 1/4" и квадратными гнездами 2" для гнездования. Клетки поддерживались в контролируемом 12-часовом цикле свет-темнота, а температура в помещении составляла от 19,4 °C до 25 °C. Мышей кормили глобальной диетой для грызунов и автоматической системой подачи воды.
2. Инструменты

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
ECM 830 Система электропорации прямоугольной фазы	BTX Harvard Apparatus	45-0052	Для электропорации in vivo
Электроды Tweezertrodes Электроды	BTX Harvard Apparatus	45-0524	Для электропорации in vivo, плоский
1 ммPicospritzer III	Parker Instrumentation	1096	Системы дозирования внутриклеточных микроинъекций
Стеклянный капиллярный пуллер	NARISHIGE	PC-10
Боросиликатные стеклянные капилляры	World Precision Instruments, Inc.
Стерео диссекционный микроскоп	Leica	M80
Микрохирургия Rongeur	F.S.T	16221-14
Микрохирургический щипец	FST от DUMONT, Швейцария	11255-20	Только для раздавливания седалищного нерва
Glass Capillary	World Precision Instruments, Inc.	TW100-4	10 см, стандартная настенная
лента	Fisherbrand	15-901-30	Для крепления мыши на пробковой доске
2, 2, 2-Трибромэтанол (Авертин)	Sigma-Aldrich	T48402	Авертин стоковый раствор
2-метил-2-бутанол	Сигма-Олдрич	152463	Авертин стоковый раствор
миРНК Флуоресцентный универсальный негативный контроль #1	Сигма-Олдрич	SIC003	Нецелевая мимиРНК с флуоресцентной
микроРНК Контроль трансфекции с Dy547	Dharmacon	CP-004500-01-05	Нецелевая микроРНК с флуоресценцией
Набор для подготовки плазмид	Invitrogen Purelink	K210016	GFP-кодирующий плазмидный препарат
Fast Green	Dye Millipore-Sigma	F7252	Для лучшей визуализации контура DRG во время инъекции
Кетамин	Putney, Inc	NDC 26637-731-51	Индукция анестезии
Ксилазин	AnaSed	NDC 59399-110-20	Индукция анестезии
Ацетаминофен	McNeil Consumer Healthcare	NDC 50580-449-36	Послеоперационное обезболивание

1902328