Адресная доставка лекарственного препарата в мышиную модель с помощью инъекции цистерны Магна

Аннотация

Источник: Zamboni, M., et al., Индукция модификации лептоменингеальных клеток с помощью интрацистернальной инъекции. J. Vis. Exp. (2020)

В этом видео показана процедура введения индуктора в большую цистерну мыши, находящейся под наркозом. Инъекция избирательно индуцирует экспрессию флуоресцентных маркеров в клетках поверхности мозга, доступных через спинномозговую жидкость, что подтверждается флуоресцентной визуализацией.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Позиционирование животного для процедуры

1. Закрепите голову животного на держателе головы. Чтобы улучшить доступ к большой цистерне, расположите тело животного примерно под углом 30° от поверхности стола, а голову вниз, чтобы установить угол 120° с остальной частью тела, и вытяните заднюю часть шеи, чтобы облегчить доступ к большой цистерне (Рисунок 1A).
2. Подложите под животное бумажные полотенца, чтобы поддерживать его тело на протяжении всей процедуры.
3. Обеспечить доставку анестезии через мундштуку и снизить концентрацию изофлурана до 2,5% и подачу воздуха до 200 мл/мин.
4. Применяют офтальмологическую мазь.

2. Воздействие Cisterna Magna

1. Побрейте заднюю часть шеи животного и продезинфицируйте область с помощью 70% этанола и бетадина.
2. С помощью хирургических ножниц выполните разрез по средней линии (около 7 мм в длину), начиная с уровня затылочной кости и расширяя ее кзади
.
3. Аккуратно отделите поверхностные мышцы соединительной ткани и шеи, потянув пинцетом с тонким кончиком в сторону от средней линии. При этом обнажится дюральная мембрана, покрывающая цистерну магна, по форме имеющая форму перевернутого треугольника.
4. Используйте стерильные абсорбционные копья или ватные палочки, чтобы остановить любое возникающее кровотечение.
5. Расположите небольшой хирургический сепаратор так, чтобы мышцы шеи были отведены в сторону и позволили визуализировать большую цистерну на протяжении всей процедуры.

3. Интрацистернальная инъекция

1. Чтобы получить доступ к большой цистерне, определите каудальный конец затылочной кости и введите иглу, которая ранее была согнута, сразу под ней.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Произойдет внезапное падение сопротивления при проколе твердой мозговой оболочки. Однако кончик иглы лишь немного проникает под менингеальную поверхность благодаря своей крючковатой форме.
2. После того, как твердая мозговая оболочка будет перфорирована, позвольте изогнутому кончику иглы проникнуть под твердую мозговую поверхность, осторожно потянув шприц вверх и параллельно телу животного, чтобы «зацепить» иглу за череп (см. рисунок 1B). Это обеспечит лучшую стабильность и предотвратит более глубокое проникновение иглы, что позволит избежать риска повреждения подлежащего мозжечка или мозгового вещества.
3. Вводите соединение медленно, чтобы избежать вмешательства в естественный поток спинномозговой жидкости.
   ПРИМЕЧАНИЕ: В зависимости от цели эксперимента скорость инфузии может варьироваться. Если требуется медленная и стабильная скорость инфузии (например, при использовании процедуры для отслеживания движения спинномозговой жидкости), может быть целесообразно использовать автоматизированную систему микроинфузии в сочетании со шприцем.
4. После инъекции дайте игле отдохнуть в месте в течение 1 минуты и осторожно извлеките ее. Используйте щипцы с тонкими наконечниками, чтобы облегчить втягивание иглы из крючкового положения.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Использование тонкой иглы (например, 30 G) не приводит к существенному повреждению менингеальной оболочки и последующему оттоку спинномозговой жидкости. Если требуются иглы большего размера, мы рекомендуем остановить утечку жидкости, надавливая на место инъекции с помощью стерильного ватного наконечника.

Результаты

Рисунок 1: Специфическая маркировка лептоменингеальных клеток с помощью интрацистернального введения эндоксифена. На панелях А и В показана разработанная процедура интрацистернального введения. Для того чтоб...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Анестезиологический блок	Univentor 410	8323102	В комплекте с испарителем, камерой и трубкой, которая соединяется с камерой и держателем головки мыши
Анестезия (изофлуран)	Baxter Medical AB	890
Betadine	Sigma-Aldrich	PVP1
Эндоксифен	Sigma-Aldrich	E8284
Этанол 70%	Histolab	1370
Шприц Hamilton (игла со скошенной углом 30G)	Hamilton	80300
Держатель головки мыши	Narishige International	SGM-4	С мундштуком для ингаляционных анхестетиков. В качестве альтернативы используйте стереотаксическую рамку
Ножницы	Fine Science Tools	15009-08
Shaver	Aesculap	GT420
Стерильные абсорбционные копья	Fine Science Tools	18105-01	Стерильные ватные палочки также являются хорошим вариантом
Хирургический сепаратор	World Precision Instrument	501897
пинцетом	Дюмон	11251-35