$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
Использовали восьминедельных взрослых самцов мышей C57BL/6N.
1. Предоперационная подготовка
- Обеспечьте наличие соответствующего запаса автоклавных, стерилизованных хирургических инструментов, оборудования, обезболивающих препаратов и обезболивающих препаратов.
- Обеспечьте достаточное рабочее место на операционном столе.
- Подготовьте операционный стол с помощью специальной хирургической пенопластовой доски с подгузником в качестве кровати для мыши. Закрепите к поролоновой плите согревающую прокладку медицинским скотчем, накрытым стерильной марлей.
- Создайте ретракторы, согнув акупунктурную иглу с помощью сосудистых щипцов, сложив ее пополам, а затем согнув кончик сложенной акупунктурной иглы в крючок. Закрепите резиновую полоску на конце акупунктурной иглы и с помощью кнопки для большого пальца закрепите конец резиновой полоски на пенопластовой доске.
- Откалибруйте стереомикроскоп, выберите стереомикроскоп с достаточным фокусным расстоянием. Закройте кнопки зума/фокусировки стерилизованной алюминиевой фольгой, чтобы хирург мог отрегулировать их во время операции. Стерилизованная алюминиевая фольга была размещена на кнопках зума/фокусировки, что позволило хирургу использовать ее в стерильных перчатках.
2. Мышиная анестезия и подготовка
- Взвесьте мышь и обезболите ее в соответствии с массой тела (изофлуран 3%). Следите за тем, чтобы мышь не реагировала на защемление межпальцевых промежутков ее лапы для подтверждения глубины анестезии. На протяжении всей процедуры должна поддерживаться достаточная глубина анестезии (1% изофлуран).
- Наносите офтальмологическую мазь на глаза с обеих сторон, чтобы предотвратить раздражение или высыхание роговицы во время операции.
- Подготовьте место операции, сбрив шерсть на шее и груди с помощью автоматической машинки для стрижки. Удалите и очистите выпавшие волосы.
- Положите мышь в лежачем положении на грелку, накрытую стерильной марлей. Поддерживайте температуру мыши на уровне 37 °C в течение всей работы. Зафиксируйте мышь медицинской лентой, чтобы передние конечности отводились горизонтально и не позволяли двигаться задним конечностям и хвосту. На мышей была помещена стерилизованная одноразовая хирургическая простыня с соответствующим открыванием.
3. Оперативное вмешательство
- Введите трамадол в качестве упреждающей анальгезии (20 мг/кг, внутрибрюшинно или внутривенно). Отметьте поперечный разрез на верхнем крае ключицы. Используйте три цикла чередования скрабов из дезинфицирующего раствора йодофора и этанола для дезинфекции места операции. Подтвердите глубину анестезии щипцом ноги перед операцией.
- Работая под микроскопом, сделайте поперечный разрез 4 мм вдоль метки с помощью стерильного скальпеля. При необходимости увеличивайте разрез во время процедуры.
- Тупо рассекайте через подкожную фасцию и определите нижнюю границу подчелюстной железы. Потяните подчелюстную железу вверх, чтобы обнажить надключичную ямку и грудину.
ПРИМЕЧАНИЕ: В этой области могут быть кровеносные сосуды малого калибра. Для остановки кровотечения можно использовать электрокаутеризацию. - Сделайте частичный срединный разрез грудины (~4 мм), разрезав грудину от головы до хвоста по средней линии. Защитите плевру, сердце и кровеносные сосуды во время стернотомии.
- Определите стерноподъязычную мышцу. Осторожно потяните грудину с помощью двух небольших специализированных ретракторов, сделанных из акупунктурных игл, и определите грудиноподъязычную мышцу над трахеей и пищеводом. Втяните эту мышцу, чтобы обнажить сонную артерию, внутреннюю яремную вену, диафрагмальный нерв, блуждающий нерв, трахею и пищевод.
ПРИМЕЧАНИЕ: Осторожно втяните грудину, чтобы избежать открытого пневмоторакса. В отличие от человека, пищевод мыши находится не за трахеей, а примыкает к трахее с левой стороны. - Определите левое плечевое сплетение. На латеральном крае левой внутренней яремной вены вытяните фасцию и жировую ткань наружу, чтобы обнажить плечевое сплетение. Ищите верхний ствол, состоящий из шейных или С5 и С6 нервов, которые имеют три ветви. Определите средний ствол, состоящий из нерва С7, и нижний ствол, состоящий из С8 и грудного или Т1 нервов, вдоль верхнего туловища до хвоста мыши.
ПРИМЕЧАНИЕ: На поверхности плечевого сплетения имеются продольные кровеносные сосуды. Используйте электрокоагуляцию для предотвращения кровотечения. При отделении левого плечевого сплетения защитите хилезный канал, чтобы избежать хилезного свища. - Соберите левый нерв С7. Рассеките передний отдел и задний отдел среднего ствола (нерв С7) дистально до уровня отдела и спинного мозга под ключицей и заблокируйте нерв С7 0,1 мл 2% лидокаина путем местной инфузии в нервный ствол. Резекцию нерва С7 пружинными ножницами Ваннаса в местах его слияния с боковым и задним канатиком. Обрежьте нерв С7 так, чтобы длина каждого отдела была одинаковой.
ПРИМЕЧАНИЕ: Передний и задний отделы нерва С7, а также передний и задний отделы верхнего и нижнего стволов проходят на большое расстояние до слияния, поэтому нерв С7 должен быть достаточно освобожден перед резекцией. На самом деле, нерв С7 не всегда делится на два отдела; Иногда его делят на три отдела, а в редких случаях даже на четыре. - Удалите левую пластинку C6 ventralis. Тщательно защитите диафрагмальный нерв и разрежьте переднюю лестничную мышцу на уровне сегмента С6, чтобы обнажить нервный корешок С7. Отрежьте микрощипцами небольшие ветви нерва С7, иннервирующего параспинальную мышцу. Осторожно вытяните нерв С7 и осторожно иссеките вентральную пластинку С6.
ПРИМЕЧАНИЕ: Между медиальной стороной левой сонной артерии и латеральной стороной пищевода имеется костный выступ. Этот костный выступ представляет собой вентральную пластинку 6-го шейного позвонка. Продольная мышца латерального края вентральной пластинки C6 является передней лестничной мышцей, а диафрагмальный нерв проходит по поверхности передней лестничной мышцы. - Соберите правый нерв С7. Разрежьте переднюю лестничную мышцу с правой стороны, аналогично левой, и пересеките правый нервный корешок С7 близко к межпозвоночному отверстию. Рассеките правый нерв С7 от уровня его деления.
ПРИМЕЧАНИЕ: Осторожно перережьте правый нерв С7, чтобы предотвратить повреждение кровеносных сосудов под нервом. - Переложите левый нерв С7.
- Удалите мускулистый longus colli рядом с телами позвонков частично с обеих сторон. Тупо отделите и расширьте пространство между трахеей-пищеводом и телом позвонка.
- Отправьте нейлоновый шов 5-0, сложенный в половинном порядке, с правой стороны тела позвонка на левую сторону через преспинальный путь.
- Зажмите левый нерв С7 с помощью инфузионной трубки и направьте нерв в правую сторону через преспинальный путь.
- Аккуратно втяните трахею и пищевод и прикрепите передний и задний отделы левого нерва С7 к правому нервному корешку С7 без натяжения с помощью нейлоновых швов 12-0. Наложите швы на эпиневрию вокруг нервов 4-5 швами, чтобы сильно коаптировать нервы.
ПРИМЕЧАНИЕ: Очень важно выбрать пластиковую инфузионную трубку соответствующей толщины. Слишком тонкая трубка может повредить нерв, а слишком толстая трубка может повредить трахею и пищевод. Кроме того, пространство между трахеей-пищеводом и телом позвонка представляет собой V-образное пространство, и разрезание части мышечной длинной оболочки может сократить путь переноса.
4. Закрытие раны
:
- Орошите рану стерильным физиологическим раствором и высушите ее стерильной марлей.
- Зашить грудину и закрыть кожу с помощью монофиламентных швов 5-0
.
5. Послеоперационный уход:
- Подождите, пока мышь проснется от наркоза. Переложите мышь в чистую клетку без подстилочного материала, но утепленную согревающим одеялом. Наблюдайте за мышью до тех пор, пока она не станет передвигаться. Используйте трамадол (20 мг/кг, внутримышечно) в качестве послеоперационной анальгезии.
- Поместите мышей в клетку для восстановления и наблюдайте за ней до выздоровления. Восстановите воду и рацион мышей после операции. Ежедневно наблюдайте за мышами после операции на предмет признаков ухудшения здоровья или инфекции, включая недоедание, сгорбленную осанку и взъерошенную шерсть. Через две недели после операции следует снять швы.
ПРИМЕЧАНИЕ: Наносите эритромициновую мазь на поверхность раны каждый день в течение трех дней подряд. - Если наблюдаются какие-либо осложнения, такие как отек раны, их следует немедленно устранить.