Опухолей мочевого пузыря устанавливается у самок мышей в минимально инвазивной образом, через катетеризации, местные прижигание, и последующей адгезии клеток карциномы, чтобы сжечь сайтов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Ортотопическая модели мышей раку мочевого пузыря
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
В этой простой процедурой, опухолей мочевого пузыря, устанавливаются в женских C57 мышей с помощью катетеризации, местные прижигание, и последующей клеточной адгезии. После их пузыри являются transurethrally катетеризация и осушенных, животные снова катетеризации разрешить вставку платиновой проволоки в пузыри без повреждения уретры и мочевого пузыря. Катетеры, изготовленные из тефлона, чтобы служить изолятором для проводов, которые будут проводить электрический ток в мочевой пузырь для создания ожогов. Электрокоагуляции единицы используются, чтобы предоставить 2,5 Вт на выступающий край проволоки, сжигать внеклеточной слоев и предоставления мест для вложения клетки карциномы, которые поставляются в виде суспензии в мочевой пузырь через последующей катетеризации. Клетки остаются в мочевом пузыре в течение 90 минут, после чего катетер удаляют и пузыри позволили осушить естественно. Развитие опухоли контролируется с помощью ультразвука. Особое внимание уделяется технике катетеризации в прилагаемом видео.
Протокол
1. Животные
- Женский C57BL/6J мыши (Mus мышцы) проверяются свободные инфекционных эктопаразитов, гельминтов эндопаразиты, и антитела к 17 мышиных вирусов поставщика до отгрузки. Мыши размещены в AAALAC аккредитованных животных объекта Тьюлейн университета в соответствии с Руководство по уходу и использованию лабораторных животных 1.
- В частности, мыши группа размещалась (4-5 мышей / клетку) в индивидуально вентилируемые поликарбоната cageswith microisolation фильтра вершины на лиственных постельных принадлежностей. Они предоставляются вволю Корм для грызунов и водопроводной воды.
- Мыши могут 7 дней, чтобы акклиматизироваться перед началом исследования.
2. Клетки
- Мышиные переходный рак клеточной линии MB49 используется для производства опухолей мочевого пузыря.
- Клетки культивировали в среде Дульбекко изменение Орла с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 100 ед / мл пенициллина и 100 ЕД / мл стрептомицина.
- Культуры при температуре 37 ° C и 5% СО 2 со средствами массовой информации меняется каждые два-три дня.
3. Животное Ортотопическая Модель опухоли
Инстилляции модели опухоли мочевого пузыря, описанные здесь является модификацией процедуры, описанной Гюнтером и др. 2.
- Анестезия индуцирована с 2% изофлуран (MWI / VetOne, Меридиан, ID, Cat # 501017) в кислороде и поддерживается на уровне 0.75-1.25%. (Несколько животных можно лечить одновременно, что потребует увеличения изофлуран уровнях.) Для предотвращения высыхания роговицы, глаза смазываются мазью глазной искусственные слезы. Тепло тела сохраняется с подогревом подкладку под бумагу драпировка.
- Мех в нижней части спины обрезается по содействию контакт с пластиной заземления металл, и бритая площадь покрыта электропроводности геля.
- Каждая мышь, затем индивидуально помещен в спинной recumbancy на пластине заземления металл, и мочевой пузырь катетер transurethrally использованием смазкой 24 калибра, 3 / 4 дюйма, более-иглы IV катетер с стилет удалены.
- Мочевого пузыря сливают мочи и платиновой проволоки вводится через катетер в мочевой пузырь оставляя оголенный провод на каждом конце катетера - примерно 2 мм на lumenal конце катетера. Проволока из платины из-за сопротивления материала к окислению.
- 2,5 Вт Ток подается на мочевом пузыре в течение примерно 0,5 секунды, касаясь внешней части провода с электрокоагуляции блок установлен в коагуляции.
- Провод затем переехал в другое место в мочевом пузыре и еще 2,5 Вт заряд применяется.
- Проволока удаляется, и 100 мкл MB49 клетки в концентрации 1х10 6 кл / мл прививается через катетер в мочевой пузырь через 1 мл шприца.
- Шприцы остались прикреплены к катетеры для предотвращения оттока клеточные суспензии, и катетеризация мышей ведутся под наркозом в течение 90 минут, чтобы дать клеткам прикрепляться к записи сайтов.
- 100-200 мкл стерильного физиологического раствора находится в ведении IP инъекции каждой мыши до выздоровления.
- В конце инкубационного периода катетеры удаляются, и животные могут восстановить на площадку нагревается до восстанавливающее рефлексы возвращения, после чего мыши возвращаются в своих клетках дома.
4. Ультразвук
- Опухоли могут расти в течение 3-5 дней до мышей пройти ультразвуковое исследование мочевого пузыря контролировать рост опухоли.
- Для начального обследования УЗИ, животных под наркозом, как описано выше. Мыши находятся в спинном recumbancy и брюшной кожа подготовлена, закрепляя меха.
- Калибра 24 IV катетер transurethrally в мочевом пузыре. На данный момент, мочевого пузыря можно слить и моче, собранной для дальнейшего анализа.
- 100 мкл стерильного физиологического раствора закапывают в мочевой пузырь через катетер мочевого пузыря для улучшения видимости на УЗИ.
- Гель Ультразвуковое проводимости наносят на живот, и УЗИ проводится для оценки стенки мочевого пузыря и просвет.
5. Представитель Результаты:
Опухолевые ткани начнут появляться через 3-5 дней после прививок. По нашему опыту, в группе из 12 мышей, 50% или более, обычно имеют обнаружить массу ткани в мочевом пузыре (0,5 - 1,0 мкл, используя V = π / 6 · L · Вт · ч) на пятый день. При использовании МБ 49 клеток, опухоли будет продолжать расти и эвтаназии будет требоваться 24 день, если мышей не получают лечения. Эвтаназия рекомендуется при мышей становятся вялыми или худосочные, дисплей взъерошил мех, скрючившись, и не отвечающих поведение, или когда они потеряют 20% своего первоначального веса тела.
Опухоли растут быстро и будет иметь некротические центров после того как они достигают массы 200 мг и более, якобы из-за 3 клеток в развивающиеся опухоли размножаться быстрее, чем могут обслужить ангиогенных кровоснабжения. Можно также косвенно контролировать прогрессирования опухоли с помощью уровня hematurea, который предположительно связан с быстрым ангиогенеза в развивающихся опухолей. Это было последовательно отметил, что моча необработанной опухоли мышей, содержащихся крови 14-й день. Концентрация эритроцитов в крови появились увеличить с течением времени у этих мышей, и объемы собранной мочи уменьшается. Опухоли более 50 мг также может быть пальпируется с относительной легкостью, как правило, на 14 дней после прививок.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Это минимально инвазивный метод установления ортотопической опухоли мочевого пузыря у самок мышей также может применяться для типов клеток, кроме MB49, хотя и разные результаты следует ожидать. При менее агрессивных опухолевых клеток используются, увеличение мощности немного (по 0,5 Вт шагом к созданию новых оптимальных) даст области более склонны к привязанности опухоли клетки, и более пузыря времени инкубации для привили клетки даст большее количество клетка крепления на ожог сайты (неопубликованные данные). Хотя неко...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами, установленными Институциональные уходу и использованию комитета Тьюлейн университета.
Благодарности
Эта работа финансировалась Национальным научным фондом КАРЬЕРА награду (конбет-0846395) и Департамент сравнительной медицины, Тьюлейн университета.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Мыши C57Bl/6J | Jackson Laboratory | 000664 | 3-5 недель |
| Поликарбонатные клетки и вентилируемая стойка | Lab Products | Super Mouse 750 | 327mm x 190mm x 143mm |
| Подстилка из твердых пород дерева | Harlan Laboratories | Laboratory –grade SaniChips | |
| Корм для грызунов | Harlan Laboratories | Rodent Diet 2019 | |
| Внутривенный катетер | MWI Veterinary Supply | 009231 | 24 G x ¾ in. |
| Электрокоагулятор | Bovie Medical Corporation | Aaron 900 | |
| Ультразвуковой аппарат | Sonosite | 180 Plus (Vet) | |
| Клеточная линия MB49 | Wake Forest University Baptist Medical Center | н/д | |
| DMEM | Invitrogen | 21063-029 | |
| Фетальная бычья сыворотка | Gemini Bio Products | 100106 500A57B | |
| Пенициллин-стрептомицин | Invitrogen | 15140-163 |
Ссылки
- Institute of Laboratory Animal Resources. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , National Academies Press. Washington, DC. (1996).
- Gunther, J. H., Jurczok, A., Wulf, T., Brandau, S., Deinert, I., Jocham, D. Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49). Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).
- Zhang, X., Atala, A., Godbey, W. T. Expression-targeted gene therapy for the treatment of transitional cell carcinoma. Cancer Gene Ther. 15, 543-552 (2008).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
