Номера для обрастания PEG силана монослоя десорбируется с индивидуально адресуемых электродов ITO на стекле путем применения восстановительного потенциала. Электрохимический зачистки ПЭГ-силана слой из микроэлектродов ITO позволило клеточной адгезии пройдет в пространственно-определенных моды, с сотовыми моделей соответствующих близко к электроду узоры.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Структурирование Ячейки оптически прозрачные электроды индия оксид олова
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Способность осуществлять точный пространственный и временной контроль над клеточной поверхности взаимодействия является важной предпосылкой для сборки многоклеточных конструкции, выступающей в качестве в пробирке имитирует родных тканей. В этом исследовании, фотолитографии и травления мокрые были использованы для изготовления индивидуально адресуемых оксида индия и олова (ITO) электродами на стеклянных подложках. Стеклянные субстраты, содержащие ITO микроэлектродов были изменены с поли (этиленгликоля) (ПЭГ) силана, чтобы сделать их белков и клеточных резистивный. Наличие изоляционного PEG молекул на поверхности электрода была проверена циклической вольтамперометрии использованием калий феррицианида в качестве окислительно-восстановительных молекулы репортер. Важно отметить, что применение восстановительного потенциал вызвало десорбции слоя PEG, в результате регенерации проводящей поверхности электрода и внешний вид типичного феррицианида окислительно-восстановительных пиков. Применение восстановительного потенциала также соответствовало переключение свойства ITO электродов из ячейки без клея на сотовые-клея. Электрохимический зачистки ПЭГ-силана слой из микроэлектродов ITO позволило клеточной адгезии пройдет в пространственно-определенных моды, с сотовыми моделей соответствующих близко к электроду узоры. Micropatterning из нескольких типов клеток было продемонстрировано на этих подложках. В будущем управление biointerfacial свойства предоставляемых с помощью этого метода позволит инженера сотовой микросреды через узел из трех или более типов клеток в точные геометрические конфигурации оптически прозрачной подложке.
Протокол
Часть I: структурирование электродов
- Чистота и обезвоженной ITO покрытием стеклянные пластинки были покрыты положительными фоторезиста
- Поверхность выпекают при 100 ° С для удаления растворителей из сопротивляться
- После выпечки, поверхность подвергалась воздействию ультрафиолетового света через фотошаблон использованием Canon маски Aligner
- Подвергается регионах были сняты в разработчиком решения
- Поверхности было трудно запеченные для удаления оставшихся разработчиком решения
- ITO регионов не защищены фоторезиста структурирование травились прочь в кислоте травителя
- Оставшиеся фоторезиста удаляют sonicating в ацетоне с образованием ITO электродов
Часть II: Модификация поверхности
- Измененный электроды, очищаются в камеру плазмы и изменение с 2% ПЭГ силана в толуоле. Инкубационный осуществляется в течение 2 часов, после чего 2 часа выпечки.
Примечание: Этот процесс осуществляется в перчатке мешок с азотом, чтобы избежать присутствия влаги, как ПЭГ силан реактивного к нему.
Часть III: электрохимии
- Сталь провода крепятся к электроду колодки.
- PEG силана изменение электроды расположены в электрохимической ячейке для выполнения электрохимических экспериментов.
- PEG силана из взаимосвязанных регионов снято с помощью трех-электродной системы в PBS.
Часть IV: Сотовый паттерн
- Фибробласты инкубировали с недавно лишили субстратов. При инкубации, эти клетки прикрепляются к PEG силана лишил регионы, однако, клетки не будут связываться в другом месте на поверхности.
- Рисунком клетки инкубируют в пресной СМИ и визуализируется с помощью микроскопа.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В этом видео, мы продемонстрировали, клетка структурирование на оптически прозрачные электроды индия олова. После изготовления ITO электродов с помощью фотолитографии, они были изменены с клеткой-резистивный монослой PEG силана. Это монослоя десорбируются использованием электрохимии переключения поверхности от клетки-резистивная к клетке-клея. Структурирование 3T3 мышиных фибробластов было показано в своем видео. Мы также структурирование гепатоцитов, первичных элементов и звездчатые клетки, используя ту же технику. Кроме того, сделав неско...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| Оксид индия-олова | Прочее | Delta Technologies | CB 40IN | |
| ПЭГ-силан | Реагент | Gelest Inc. | SIM6492.66 | |
| Соляная кислота | Реагент | Sigma-Aldrich | 320331 | |
| Азотная кислота | Реагент | Sigma-Aldrich | 258121 | |
| Этанол | Реагент | Sigma-Aldrich | 459836 | |
| Ацетон | Реагент | Sigma-Aldrich | 650501 | |
| Толуол | Реагент | Sigma-Aldrich | 34866 | |
| Среда | Реагент | Invitrogen | ||
| Коллаген | Реагент | Sigma-Aldrich | C3867 | |
| Фибробласты мыши 3T3 | Клеточная линия | ATCC |
Ссылки
- Lee, J. Y., Jones, C., Zern, M. A., Revzin, A. Analysis of Local Tissue-Specific Gene Expression in Cellular Micropatterns. Analytical Chemistry. 78, 8305-8312 (2006).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
