Мы опишем протокол для микротехнологий градиента генерирующих микрожидкостных устройств, которые могут генерировать пространственные и временные градиенты в четко определенных микроокружения. При таком подходе, градиент генерирующих микрожидкостных устройство может быть использовано для изучения направлены миграции клеток, эмбриогенез, заживление ран и рака метастазы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Градиент генерирующих микрожидкостных Устройство для клеточной биологии
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Изготовления и эксплуатации градиент генерирующих микрожидкостных устройств для изучения сотовой поведение описано. Микрожидкостных платформа позволяет экспериментальный инструмент, потому что она может точно управлять потоками жидкости, обеспечивают высокую пропускную экспериментов, а также генерировать стабильный растворимый градиенты концентрации. По сравнению с обычными генераторами градиент, поли (диметилсилоксана) (PDMS)-основанной микрожидкостных устройств может генерировать стабильный градиент концентрации факторов роста, с четко определенными профилями. Здесь, мы разработали простой градиент генерирующих микрожидкостных устройств с тремя раздельными входами. Три микроканалов объединены в один микроканальных для создания градиентов концентрации. Стабильность и форму градиенты фактор роста были подтверждены флуоресцеина isothyiocyanate (FITC)-декстрана с молекулярной массой похож на эпидермальный фактор роста (EGF). Используя этот микрожидкостных устройств, мы показали, что фибробласты подвергается градиентов концентрации ЭФР мигрировал в сторону более высоких концентраций. Направленной ориентации миграции клеток и моторику мигрирующих клеток были количественно оценены ячейки отслеживания анализа. Таким образом, этот градиент генерирующих микрожидкостных устройство может оказаться полезным для изучения и анализа поведения мигрирующих клеток.
Протокол
А. микротехнологий градиента генерирующих микрожидкостных устройств
- Пластины кремния обрабатывают реактивные кислородной плазмы (5 мин при 30 Вт, Harrick Научные, Нью-Йорк).
- Отрицательные фоторезиста (ГУ-8 50, Microchem, MA) является спин-покрытием при 1000 оборотов в минуту в течение 1 мин на пластины кремния.
- Пластины мягкой выпекают при температуре 65 ° С в течение 10 мин, а затем при 95 ° С в течение 30 мин на плите.
- Пластины под действием УФ света (200 Вт) в течение 3 мин через маску прозрачности с минимальным размером особенностью 30 мкм.
- Пластины сообщение выпекают при температуре 65 ° С в течение 1 мин, а при....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Клетки подвергаются стабильный градиент концентрации ЭФР в микрожидкостных устройств мигрировал в сторону более высоких концентраций. Направленной ориентации клеточной миграции, хемотаксиса индекс, моторику мигрирующих клеток были исследованы по мобильному отслеживания анализа. Таким образом, этот градиент генерирующих микрожидкостных платформы могут быть полезны для изучения рака метастазы, эмбриогенеза, и аксон руководства.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| Dextran-FITC | Реагент | Sigma-Aldrich | FD10S | Декстран, конъюгированный с флуоресцеинизотиоцианатом (FITC) (10kD) |
| hr-EGF | Invitrogen | 13247-051 | рекомбинантный эпидермальный фактор роста человека | |
| PDMS | K.R. Anderson Co. | 2065622 | Поли(диметилсилоксан) (PDMS), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) | |
| Негативный фоторезист | MicroChem Corp. | SU-8 50 | ||
| Кремниевая пластина | кремниевая пластина, 4 дюйма | |||
| Чашки Петри | ||||
| Полиэтиленовые трубки | BD Biosciences | PE 20 | ||
| PBS | Invitrogen | |||
| Фибронектин | ||||
| NIH 3T3 | линия клеток | фибробласты | ||
| Инвертированный микроскоп | Nikon Instruments | TE 2000 |
Ссылки
- Jeon, N. L., Baskaran, H., Dertinger, S. K. W., Whitesides, G. M., Van de Water, L., Toner, M. Neutrophil chemotaxis in linear and complex gradients of interleukin-8 formed in a microfabricated device. Nat. Biotechnol. 20, 826-830 (2002).
- Lin, F., Nguyen, C. M., Wang, S. J., Saadi, W., Gross, S. P., Jeon, N. L.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
