Градиент генерирующих микрожидкостных Устройство для клеточной биологии

Summary

Мы опишем протокол для микротехнологий градиента генерирующих микрожидкостных устройств, которые могут генерировать пространственные и временные градиенты в четко определенных микроокружения. При таком подходе, градиент генерирующих микрожидкостных устройство может быть использовано для изучения направлены миграции клеток, эмбриогенез, заживление ран и рака метастазы.

Abstract

Изготовления и эксплуатации градиент генерирующих микрожидкостных устройств для изучения сотовой поведение описано. Микрожидкостных платформа позволяет экспериментальный инструмент, потому что она может точно управлять потоками жидкости, обеспечивают высокую пропускную экспериментов, а также генерировать стабильный растворимый градиенты концентрации. По сравнению с обычными генераторами градиент, поли (диметилсилоксана) (PDMS)-основанной микрожидкостных устройств может генерировать стабильный градиент концентрации факторов роста, с четко определенными профилями. Здесь, мы разработали простой градиент генерирующих микрожидкостных устройств с тремя раздельными входами. Три микроканалов объединены в один микроканальных для создания градиентов концентрации. Стабильность и форму градиенты фактор роста были подтверждены флуоресцеина isothyiocyanate (FITC)-декстрана с молекулярной массой похож на эпидермальный фактор роста (EGF). Используя этот микрожидкостных устройств, мы показали, что фибробласты подвергается градиентов концентрации ЭФР мигрировал в сторону более высоких концентраций. Направленной ориентации миграции клеток и моторику мигрирующих клеток были количественно оценены ячейки отслеживания анализа. Таким образом, этот градиент генерирующих микрожидкостных устройство может оказаться полезным для изучения и анализа поведения мигрирующих клеток.

Protocol

А. микротехнологий градиента генерирующих микрожидкостных устройств

1. Пластины кремния обрабатывают реактивные кислородной плазмы (5 мин при 30 Вт, Harrick Научные, Нью-Йорк).
2. Отрицательные фоторезиста (ГУ-8 50, Microchem, MA) является спин-покрытием при 1000 оборотов в минуту в течение 1 мин на пластины кремния.
3. Пластины мягкой выпекают при температуре 65 ° С в течение 10 мин, а затем при 95 ° С в течение 30 мин на плите.
4. Пластины под действием УФ света (200 Вт) в течение 3 мин через маску прозрачности с минимальным размером особенностью 30 мкм.
5. Пластины сообщение выпекают при температуре 65 ° С в течение 1 мин, а при....

Discussion

Клетки подвергаются стабильный градиент концентрации ЭФР в микрожидкостных устройств мигрировал в сторону более высоких концентраций. Направленной ориентации клеточной миграции, хемотаксиса индекс, моторику мигрирующих клеток были исследованы по мобильному отслеживания анализа. Таким образом, этот градиент генерирующих микрожидкостных платформы могут быть полезны для изучения рака метастазы, эмбриогенеза, и аксон руководства.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Декстран-FITC	Реагент	Sigma-Aldrich	FD10S	Флуоресцеин изотиоцианат (FITC) конъюгированный-декстран (10kD)
hr-EGF		Invitrogen	13247-051	человеческий рекомбинантный эпидермальный фактор роста
PDMS		K.R. Anderson Co.	2065622	Поли(диметилсилоксан) (PDMS), Dow Corning Sylgard 184 (8,6 фунта)
Негативный фоторезист		MicroChem Corp.	SU-8 50
Si вафельная				силиконовая пластина, 4 дюйма
чашки
Петри Полиэтиленовая трубка		BD Biosciences	PE 20
PBS		Invitrogen
Фибронектин
NIH 3T3	клеточная линия			клетки фибробластов
Инвертированный микроскоп		Nikon Instruments	TE 2000