Мы демонстрируем металлирование, очистка и характеристика комплексов лантанидов. Комплексы, описанные здесь могут быть сопряженными с макромолекулами включить отслеживание этих молекул с помощью магнитно-резонансной томографии.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Подготовка, очистка и характеристика комплексов лантанидов для использования в качестве контрастных агентов для магнитно-резонансная томография
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Polyaminopolycarboxylate основе лигандов обычно используются для хелатных ионов лантанидов, и в результате комплексы могут использоваться в качестве контрастных агентов для магнитно-резонансной томографии (МРТ). Многие коммерчески доступные лигандов особенно полезны, поскольку они содержат функциональные группы, которые позволяют быстро, высокой чистоты и высокоурожайных конъюгации макромолекул и биомолекул с помощью амин-реактивного активированных эфиров и изотиоцианата групп или тиол-реактивного малеимидов. Хотя металлирование этих лигандов считается общеизвестным в области bioconjugation химии, тонкие различия в металлирование процедуры должны быть приняты во внимание при выборе металла исходных материалов. Кроме того, несколько вариантов для очистки и характеристики существует, и выбор наиболее эффективных процедур частично зависит от выбора исходных материалов. Эти тонкие различия часто пренебрегают в опубликованных протоколах. Здесь, наша цель заключается в демонстрации общих методов металлирование, очистка и характеристика комплексов лантанидов, которые могут быть использованы в качестве контрастных агентов для МРТ (рис. 1). Мы ожидаем, что эта публикация поможет биомедицинских ученые включить лантаноидов реакций комплексообразования в свой репертуар наиболее часто используемых реакций, облегчая выбор исходных материалов и методов очистки.
Протокол
1. Металлирование использованием LnCl 3 солей
- Растворите в воде лиганд для получения решения 30-265 мМ. Лиганд 2 - (4-isothiocyanatobenzyl)-диэтилентриамин pentaacetic кислота (р-SCN-Вп-DTPA) была использована в этом видео в концентрации 73 мМ.
- Отрегулируйте рН раствора лиганда в диапазоне от 5,5 до 7,0, добавляя 1 М NH 4 OH. В этом видео, 0,2 мл 1 М NH 4 OH решение было использовано.
- Растворите 1-2 эквивалентами LnCl 3 в воде для получения раствора с концентрацией 5-1000 мМ. В этом видео, EuCl 3 и GdCl 3 были использованы в концентрации 111 мМ. Избыток металла ч....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Учитывая растущее количество публикаций, которые включают лантаноидов основе контрастных веществ 4-14, важно, что приняты меры по подготовке, очистке, и характеризующие продукции, чтобы обеспечить воспроизводимые и сопоставимые результаты. Эти комплексы часто считается сложной, чтобы очистить и охарактеризовать по отношению к органическим молекулам в силу своей природы парамагнитных и чувствительность любые функциональные группы, которые могут быть использованы для bioconjugation. Мы описали общие методы синт.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Мы выражаем глубокую признательность запуска средства из Wayne State University (MJA), грант Американского фонда исследований старения (SMV) и Путь к независимости Карьера Переход Award (R00EB007129) из Национального института биомедицинской визуализации и биоинженерии из Национальных институтов здравоохранения (MJA).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Реактивы и оборудование | Компания | Номер в каталоге | |
| EuCl 3 • 6H 2 O | Sigma-Aldrich | 203254-5G | |
| р-SCN-Вп-DTPA | Macrocyclics | B-305 | |
| гидроксид аммония | EMD | AX1303-3 | |
| Spectra / Por Biotech эфиров целлюлозы (CE) Диализ Мембрана - 500 D MWCO | Fisher Scientific | 68-671-24 | |
| Millipore IC Millex-LG фильтровальные установки | Fisher Scientific | SLLG C13 NL | |
| ксиленола оранжевый тетранатриевая соль | Альфа Aesar | 41379 | |
| уксусная кислота | Fluka | 49199 | |
| D 2 O | Кембриджский Изотопный Laboratories, Inc | DLM-4-25 | |
| водоочиститель | ELGA | Purelab Ультра | |
| высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии | Shimadzu | LCMS-2010EV | |
| Анализатор время релаксации | Bruker | mq60 minispec | |
| UV-VIS спектрофотометр | Fisher Scientific | 20-624-00092 | |
| замораживание сушилка | Fisher Scientific | 10-030-133 | |
| измеритель pH | Hanna Instruments | HI 221 | |
| spectrofluorometer | HORIBA Jobin Ивон | Fluoromax-4 | |
| Молекулярные версии калькулятора Вес 6,46 Мэтью Монро, скачан 17 октября 2009 | http://ncrr.pnl.gov/software/ | Молекулярная Калькулятор веса |
Ссылки
- Barge, A., Cravotto, G., Gianolio, E., Fedeli, F. How to determine free Gd and free ligand in solution of Gd chelates. A technical note. Contrast Med. Mol. Imaging. 1, 184-188 (2006).
- Nagaraja, T. N., Croxen, R. L., Panda, S., Knight, R. A., Keenan, K. A., Brown, S. L., Fenstermacher, J. D., Ewing, J. R.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
