$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Базовое жилье мышей
- Размещайте мышей в пластиковых клетках с твердым дном и боковинами, а также слоем мягкой подстилки и материала для гнезда, такого как измельчение бумаги. Используйте подстилку, состоящую из измельченных кукурузных початков или древесной стружки, и регулярно меняйте подстилку для санитарии.
- Обеспечить доступ к пище и воде в неограниченном количестве. В верхней части пластиковой клетки находится бункер для корма. Выдайте правильно приготовленные гранулы корма для мышей из бункера для корма и предоставьте диспенсер для воды. Убедитесь, что верхняя часть клетки оснащена воздушным фильтром для защиты мышей от внешних загрязнений.
- Поддерживайте естественные циркадные ритмы мышей, следуя 12-часовому циклу света и темноты в помещении. Проводите поведенческое тестирование в одно и то же время суток, в идеале во время темнового цикла животного, например, в вечерние часы.
заметка: Следует соблюдать осторожность, чтобы различить мышей в жилье. Существуют различные методы различения мышей, такие как ушные пробивки, ушные бирки и маркировка хвоста.
2. Испытания в лабиринте Барнса: строительство
- Получите круглую деревянную доску диаметром 120 см.
- Вырежьте 20 круглых отверстий (4,5 см в диаметре) по периметру круга. Расположите каждую лунку на расстоянии 2,5 см от края лабиринта и на расстоянии 13 см от соседних лунок.
- Разгладьте поверхности и покрасьте их в глянцевый белый цвет (рекомендуется яркий цвет).
- Обозначьте одну сторону доски лабиринта для вставки маленьких крючков для чашек примерно в 2–3 см от каждого из 20 отверстий и поместите по два крючка для каждого отверстия (по одному с каждой стороны от каждого отверстия).
- Используйте неглубокие черные (пластиковые) диски для закрытия отверстий по бокам лабиринта крючками. Используйте крючки для крепления толстых резинок, чтобы удерживать диски на дне лабиринта.
- Надежно закрепите лабиринт Барнса на высоте 120 см над землей и вдали от других таких же высоких объектов, таких как столы или стулья. Для поддержки середины лабиринта можно использовать коробку или табурет.
- Разместите большие белые плакаты с одной фигурой на каждой стене (треугольник, круг и крест) в качестве дополнительных подсказок лабиринта на 3 сторонах лабиринта. Повесьте плакаты на стенах вокруг лабиринта для каждого испытания.
- На последней стороне лабиринта установите сплошную черную занавеску, чтобы скрыть наблюдателей, чтобы данные можно было точно записывать так, чтобы исследователи не были видны мышам в лабиринте.
- Подвесите над ареной видеокамеру с видом на всю поверхность лабиринта с высоты птичьего полета.
- Очистите каждую поверхность лабиринта (включая черные диски и мишенную коробку) водой, а затем 70% раствором этанола до и после каждого испытания на мышах.
- Поместите источник света мощностью 100 Вт на расстоянии 25 см над центром лабиринта (включите/выключите в начале/конце испытания) и убедитесь, что диски и крючки обращены к полу.
заметка: Все остальные верхние светильники в комнате должны быть выключены во время тестирования. Рекомендуется добавить ультразвуковой генератор шума, подвешенный рядом со светом мощностью 100 Вт. Включайте/выключайте его в начале/конце каждого испытания.
3. Испытание лабиринта Барнса: процедура
ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что все компоненты лабиринта очищены водой и 70% раствором этанола до и после каждого испытания, чтобы дать время полностью высохнуть перед возобновлением тестирования. Убедитесь, что у вас наготове чистящие средства, а также таймеры для испытаний.
- Разместите всех мышей в группах, используя надежный метод идентификации. Держите мышей за пределами испытательной комнаты, когда они не бегают активно по лабиринту. Это необходимо для того, чтобы они не подвергались воздействию ультразвукового шума преждевременно.
- Обращайтесь с мышами, осторожно поднимая и удерживая их от основания хвоста, держа лапы на руке.
- Для обучения пусть мыши будут бегать по лабиринту ежедневно один раз в день в течение 7 дней подряд, чтобы оценить обучение/приобретение.
заметка: Одно долгосрочное испытание может быть проведено позже для оценки памяти/удержания. В соответствии с текущим протоколом мыши-подростки обучались с 32-го дня после рождения, а долгосрочное испытание было проведено на взрослых в возрасте 4 месяцев.
- Случайным образом назначьте каждую мышь в целевое отверстие, которое будет использоваться в течение всего периода тестирования. Отверстия могут быть помечены от 1 до 20 в нижней части лабиринта или на внешней стороне периметра лабиринта, где они не видны мыши в лабиринте.
- Замените назначенный диск с отверстием на маленькую черную коробочку (23 х 11 см). Прочно прикрепите его к лабиринту Барнса с помощью резинок, соединенных с ближайшими крючками.
заметка: Целевой ящик достаточно неглубокий, чтобы мышь могла легко спуститься в него, или содержит ступеньку, гарантирующую, что мыши не придется прыгать в нее.
- Поместите мышь в центр лабиринта под чашкой, чтобы акклиматизироваться в течение 30 секунд, пока не начнется тест. Начните запись видео.
- Включите световой и ультразвуковой шумогенератор. Поднимите чашу с помощью веревочного механизма, чтобы избежать смещения начального направления движения животного. Запустите таймер и сядьте за занавеску, чтобы наблюдать.
- После того, как мышь войдет в целевое отверстие, закройте отверстие той же непрозрачной чашкой, которая использовалась в начале испытания, или связующим веществом и выключите ультразвуковой шумогенератор. Если по прошествии 5 минут мышь не вошла в цель, загоните мышь в целевую дыру.
- Убедитесь, что мышь входит в отверстие. Когда мышь окажется внутри целевой коробки, закройте отверстие и выключите шумогенератор. Дайте мыши оставаться в целевом поле в течение 1 минуты без помех.
- Несмотря на то, что целевое отверстие будет оставаться постоянным для каждой мыши в течение всего периода обучения, запускайте мышей в случайном порядке каждый день, чтобы убедиться, что они не следуют сигналам/запахам, оставленным предыдущей мышью.