Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Хирургия имплантации постпоста
ПРИМЕЧАНИЕ: Обеспечьте использование стерильных инструментов и организуйте операции и восстановление в разных зонах. После освоения процедура имплантации длится около 30 минут.
- Для обезболивания, за 30 минут до начала операции, подкожно введите бупренорфин (0,05 мг/кг) и посадите животное обратно в домашнюю клетку.
заметка: Обезболивающий эффект бупренорфина длится примерно 12 часов, долгое время после окончания процедуры. По нашему опыту, у мышей не проявлялось никаких признаков дистресса, связанных с этим вмешательством, но последующая доза бупренорфина рекомендуется через 24 часа после операции.
- Обезболить животное в камере с 2,5%–3% газом изофлураном. Подождите 3 минуты и проверьте, правильно ли обезболивает мышь, наблюдая за дыханием и отсутствием движения внутри камеры. Проведите мышь к носовому конусу на хирургическом столе с помощью грелки и путем межпальцевого сжатия убедитесь в отсутствии рефлекса отмены и снизьте изофлуран до 1,5%.
- Побрейте голову мыши с помощью электрической бритвы. Для получения стерильной среды натрите выбритый участок раствором йода, а после – 70% спиртом. Повторите эту процедуру еще два раза.
- Введите лидокаина гидрохлорид (2%, 2 мг/кг) под кожу головы для местной анестезии и подождите 5 минут для начала эффекта. Чтобы избежать повреждения глаз из-за сухости, накройте глаза мыши местной офтальмологической ветеринарной мазью.
- С помощью пары тупых щипцов захватите кожу на затылке, а тупыми ножницами (или скальпелем) сделайте продольный разрез примерно на 1,5 см, чтобы обнажить череп.
- С помощью скальпеля почесайте надкостницу. Будьте осторожны, чтобы не поцарапать слишком сильно, так как фиксация оголовья может быть нарушена, если череп начнет слегка кровоточить.
- Нанесите каплю зеленого активатора (см. Таблицу материалов) на середину черепа. Это улучшит фиксацию цемента за счет увеличения проницаемости кости.
- Приготовьте цемент: смешайте одну ложку (см. Таблицу материалов) полимера с пятью каплями мономера и одной каплей катализатора. С помощью кисти нанесите большое количество цементной смеси между ориентирами в виде лямбды и черепа брегмы.
- Быстро поместите оголовок на цемент движением от лямбды к брегме. После того, как оголовок будет установлен, повторно нанесите больше цемента вокруг нижней части, чтобы убедиться, что оголовок правильно прилипает к черепу. Чтобы гарантировать правильную фиксацию, убедитесь, что цемент нанесен обильно и что он высох, прежде чем переходить к следующему этапу.
заметка: При такой процедуре фиксации оголовок не будет отрываться и позволит проводить длительные повторные испытания; В наших руках снятие штыря составляет <10%.
- Приготовьте смесь смолы, применяя соотношение порошка и жидкости, которое обеспечивает однородную консистенцию смеси. Нанесите смолу в том месте, где был нанесен цемент, а также вокруг оголовка, чтобы защитить его поверхность.
- Подождите 3 минуты, пока смола высохнет, и закройте кожу на задней части ушей монофиламентным швом. Ватным тампоном нанесите на прооперированное место разбавленный (10–20%) раствор йода><.
заметка: Следите за тем, чтобы кожа не прилипла к смоле.
- Выключите анестезию и поместите животное под красный теплый свет, чтобы избежать переохлаждения. Поместите увлажненный корм и гидрогель или другой источник воды на основе геля на пол клетки. Не оставляйте мышь без присмотра до тех пор, пока она не придет в сознание. Как только животное полностью оправится от процедуры (обычно через 30 минут или 1 час после процедуры), поместите его в клетку с группами из трех или четырех человек, чтобы стимулировать социальное взаимодействие.