Выделение митохондрий: метод выделения митохондрий из образца ткани рака яичников человека

Аннотация

Источник: Zhan, X. et al. Получение митохондрий из тканей рака яичников и контрольные ткани яичников для количественного анализа протеомики. J. Vis. Exp. (2019)

В этом видео описывается процедура выделения митохондрий из тканей рака яичников человека с использованием дифференциального центрифугирования в сочетании с центрифугированием с градиентом плотности. Выделенные митохондрии могут быть использованы для протеомного анализа митохондриального протеома рака яичников человека.

Протокол

Все процедуры с участием людей были выполнены в соответствии с институциональными, национальными и международными рекомендациями по благополучию человека и были рассмотрены местным институциональным наблюдательным советом.

1. Подготовка митохондрий из тканей рака яичников человека

Образцы ткани яичников, включая ткани рака яичников (n = 7), были использованы для этого протокола.

1. Приготовьте 250 мл истохондриального изоляционного буфера, смешав 210 мМ маннитола, 70 мМ сахарозы, 100 мМ хлорида калия (KCl), 50 мМ Tris-HCl, 1 мМ диамина тетрауксусной кислоты (ЭДТА), 0,1 мМ этиленгликоля б....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Диаминовая тетрауксусная кислота (ЭДТА)	сигма	798681-100Г	Безводный, сыпучий, Redi-Dri, ≥98%
ДТТ	сигма	10197777001	1,4-Дитиотрейто
Этиленгликоль бис (2-аминоэтиловый эфир)тетрауксусная кислота (EGTA)	сигма	Е0396-10Г	BioXtra, ≥97 .0%
гомогенизатор	Технология SilentShake	HYQ-3110
Низкотемпературный сверхскоростной центрифугатор	Эппендорф	5424Р
центрифуга	Сянъи	TDZ4--WS
маннитол	Маклин	M813424-100Г	Маннит — это полиол (многоатомный спирт), получаемый путем гидрогенизации из фруктозы, который действует как подсластитель, увлажнитель и наполнитель. Обладает низкой гигроскопичностью и плохой растворимостью масла.
Ингибитор протеазы фенилметансульфонилфторида (PMSF)	Соларбио	П0100-1МЛ	PMSF является ингибитором протеазы, который реагирует с остатками серина с целью ингибирования трипсина, химотрипсина, тромбина и папаина.
Хлористый калий	Маклин	P816354-25G	Хлорид калия, KCI, также известный как муриат калия и сильвит, представляет собой бесцветное кристаллическое твердое вещество с соленым вкусом, которое плавится при 776 °C (1420 OF). Он растворим в воде, но нерастворим в спирте. Хлористый калий используется в удобрениях, фармацевтике, фотографии, а также в качестве заменителя соли